作者：路西林，刘建辉，薛会敏，杨建峰 作者单位：邯郸市第三医院检验科 河北省人民医院检验科 邯郸市邯钢医院检验科
【关键词】 角膜溃疡，真菌性；培养；Giemsa染色
真菌性角膜溃疡是一种致盲率较高的感染性角膜病，临床确诊困难，仅靠病史和临床表现是不够的，只有在病变角膜处找出真菌才能确诊［1］。为寻找更适合临床应用的又准确又快速的方法，我们对2006年9月—2008年8月在我院就诊的所有角膜溃疡患者进行眼角膜刮片染色检查和真菌培养，现将2种方法结果比较如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 拟诊为真菌性角膜溃疡的244例患者，男152例，女92例，年龄16～75岁，中位数40.5岁，病程4 d～3个月。左眼134只，右眼110只。植物外伤史142例，长期应用抗生素无效且病情加重80例，不明原因56例。
1.2 检测方法
1.2.1 Giemsa染色法： 由专业人员取材，所有患者均经1%丁卡因眼角膜局部表面麻醉，在无菌操作下用刮铲刮取角膜溃疡边缘或溃疡底部的菌丝苔被2份，1份在玻片上均匀涂片，自然干燥后用甲醇固定，Giemsa染液染20 min，倾去染液，用蒸馏水冲洗，干燥后显微镜(Olympus，日本产)下观察真菌菌丝、孢子、细菌以及组织细胞、寄生虫等［2］。
1.2.2 真菌培养法： 1份标本在无菌操作下接种于沙氏琼脂培养基斜面，置于25～28℃、湿度40%～50%温箱中孵育培养7～10 d，有真菌生长者取菌落采用乳酸酚棉蓝染液制作临时性湿片标本，做真菌菌属的鉴定和药物敏感实验。实验用抗真菌性药物有两性霉素B、克霉唑、氟康唑、酮康唑、特比耐酚、伊曲康唑及那他霉素等［3］。若菌属鉴定困难的菌株，可取菌落做小培养法(钢圈法)鉴定［2］。
1.3 统计学方法 用SPSS 11.5统计软件进行统计分析，计数资料以率表示，2种方法比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 Giemsa染色法 新鲜丝状真菌、类酵母菌染为紫蓝色，核蓝紫色，胞壁、中隔及死亡菌丝不着色而仅显折光空晕，背景为粉红或淡蓝色；细菌染为蓝色；组织细胞核染紫蓝色、胞质蓝色，可见中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、水肿角膜上皮细胞等(图1见封3)。244例患者中镜下找到真菌164例、细菌12例、棘阿米巴原虫1例。Giemsa染色法的真菌检出率是67.2%，与文献报道角膜刮片Giemsa染色法的敏感性为66％［4］相接近，见表1。
2.2 真菌培养法 培养多在3d显现菌落，也有生长缓慢者在10d左右观察到菌落，根据真菌生长速度、菌落形态、颜色以及乳酸酚棉蓝染色，观察菌丝有无横隔、色泽、孢子的形态、大小、结构等确定真菌菌属(图2见封3)。真菌生长169例，167株鉴定到属，有2株待鉴定，主要致病菌为镰刀霉属。培养的真菌检出率是69.3%，与文献报道的真菌检出率65.43%［5］相接近，见表1。表1 角膜溃疡刮片Giemsa染色法和真菌培养法比较
3 讨 论
真菌性角膜溃疡是致盲性眼病之一。该病首先由Leber于1878年报道，近10多年来，由于抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂等的广泛应用；植物枝叶、稻谷、尘土等损伤眼导致角膜病变改变了眼局部的微环境，使该病在我国有明显增多趋势［6］。患者多数病情严重，且抗真菌药物缺乏，治疗困难，所以探索一种快速且阳性率高的方法对指导临床治疗极为重要。
Giemsa染色法优点：简单，快速，观察之后，典型涂片可长期保存。通过Giemsa染色不仅可以观察真菌菌丝、棘阿米巴包囊，还可观察到细菌及感染角膜的细胞像，如中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润，水肿的角膜上皮细胞等，可以帮助推断疾病的性质。缺点：涂片只能确定有无真菌，而不能报告真菌菌属和药物敏感实验。真菌培养优点：既能确定真菌的菌属又能报告药物敏感实验结果，为临床提供更可靠的治疗药物，使患者达到更好的治疗效果。缺点：时间需要长约7～10 d，培养过程复杂，且需要合格的生物安全实验室和特殊设备。
Giemsa染色法的真菌检出率67.2%与真菌培养检出率69.3%相比无显著性差异(P>0.05)。鉴于多数患者来自农村，基层医院条件有限，且实验室需要特殊设备和技术，开展真菌培养工作比较困难,因此，推荐简单、快速并能为临床早期诊断真菌性角膜溃疡的Giemsa染色法是非常必要的。
【参考文献】
1 廖源.伊曲康唑配合氟康唑滴眼治疗真菌性角膜溃疡25例临床观察［J］.疑难病杂志,2008,7(2):107108.
2 吴绍熙.现代医学真菌检验手册［M］.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1998:7.
3 王丽娅.我国真菌性角膜炎的研究现状［J］.眼科,2005,14(3):143144.
4 Thomas PA.Fungal infections of the cornea［J］.Eye,2003,17(8):852862.
5 单秀水,肖凤枝,吴永刚,等.真菌性角膜炎病原学诊断［J］.中国实用眼科杂志,2006,24(8)：828829.
6 曾静,黄明汉,王冬梅.真菌性角膜溃疡45例临床分析［J］.国际眼科杂志,2008,8(4):830831. |
