作者：刘德琳 孙 晖 作者单位：滨州医学院 滨州市 256603
【关键词】 青光眼；视网膜节细胞；激光凝固；巩膜上静脉
青光眼是仅次于白内障的第二大致盲眼病，但是其机制目前尚不清楚，目前有多种学说解释青光眼的视神经损伤，其中比较公认的是机械学说、缺血学说、遗传学说等，但都不能完全揭示青光眼的发病机制，所以青光眼模型的建立方法各异。其中增高动物眼压是最常用的建立模型的方法，眼压升高可以导致视网膜中央动脉对视网膜内层供血不足，导致缺血缺氧、自由基形成、兴奋性中毒等，从而导致视网膜节细胞不可逆损伤，这也是青光眼的最终病理现象。目前尚无两种青光眼模型的比较报道，我们着重研究两种青光眼模型导致视网膜病理变化的比较，试图发现两种模型的区别，指导其应用，报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康、成年雄性SD大鼠（烟台绿叶制药公司）50只，体重200～300 g。将大鼠随机分为五组：正常对照组10只，光凝小梁网模型组10只，光凝小梁网假手术组10只，烙闭巩膜上静脉组10只，烙闭巩膜上静脉假手术组10只，均于右眼建立模型或假手术。
1.2 模型建立
1.2.1 光凝小梁网模型：4％水合氯醛（1 ml/100 g）腹腔麻醉大鼠，1%利多卡因滴眼，激光参数为功率0.4 W，光斑直径200 μm,持续时间0.7 s，激光直接射入小梁网，旋转大鼠使激光以锐角直接照射小梁网，每眼一周光凝90个点左右［1］。光凝两次，间隔4 d，第10天眼压超过20 mm Hg认为建立模型成功。假手术组用相同参数激光环形照射角膜避开小梁网。
1.2.2 烙闭巩膜上静脉模型：4％水合氯醛（1 ml/100 g）腹腔麻醉大鼠，1%利多卡因滴眼后固定在手术台上, 沿角膜缘剪开球结膜，分离巩膜上静脉，烧热大头针烙闭至少3条静脉及其附近静脉丛，远端静脉缺血变白，近端静脉充血说明手术成功，术后涂抗生素眼药膏，术后7 d每天0.5%氯霉素眼药水滴眼［2］。假手术组操作同上，只是烧热针头避开巩膜上静脉。
1.3 显微镜观察 按预先分组在第7天断头处死大鼠，迅速摘除眼球，亚甲蓝标记角膜上极及视神经短端。角膜上扎一小孔，浸润于4％中性甲醛中固定24 h，将固定好的眼球通过角膜上极和视神经断端对称剖开眼球，梯度酒精脱水，浸蜡，常规石蜡包埋，连续4 μm切片，常规苏木精伊红染色。采用摄像显微镜观察并照相，测量高倍视野内视乳头周围1 mm处视网膜各层厚度并计数300 μm视网膜节细胞数目［3］。
1.4 统计学分析 实验数据以x±s表示，采用单因素方差分析，P＜0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 视网膜各层厚度及形态观察 正常对照组大鼠视网膜各层结构完整，排列整齐（图1）。光凝小梁网模型组大鼠视网膜节细胞层（GCL）水肿结构松散，内丛状层（IPL）厚度变薄并出现空泡，内核层（INL）厚度变化不明显，但个别细胞核固缩，外丛状层（OPL）厚度无明显变化，外核层（ONL）厚度无变化，细胞核正常，排列整齐（图2）。其中，IPL厚度与高眼压模型假手术组比较具有显著性减少（P＜0.05）；假手术组视网膜各层与正常对照组相似，结构完整，排列整齐。烙闭巩膜上静脉组与高压模型组类似大鼠视网膜GCL松散，IPL变薄，INL厚度变薄且细胞减少，OPL厚度略变薄；ONL细胞略减少，但细胞核排列整齐（图3）；假手术组大鼠视网膜GCL水肿不明显，细胞核排列较整齐，其中IPL、INL、ONL厚度与假手术组比较均明显减少（P＜0.05），细胞核无固缩，排列整齐。
2.2 视网膜节细胞观察 正常对照组大鼠视网膜节细胞排列紧密整齐，细胞核均匀深染，胞核大小一致。光凝小梁网组大鼠视网膜节细胞排列稀疏且不规则，细胞核固缩，有些出现空泡、碎裂，部分细胞核溶解，细胞核大小不一，与假手术组比较显著减少（P＜0.05）；假手术组与正常对照组视网膜节细胞相似，排列整齐，胞核大小一致，均匀深染。烙闭巩膜上静脉组视网膜节细胞排列疏松，部分节细胞出现核固缩，染色加深，胞核大小不一，与假手术组节细胞数目相比明显减少（P＜0.05）； 假手术组视网膜节细胞相比无明显差异，节细胞排列整齐，胞核染色均一，大小一致。
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