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1.4 结果分析：用Labworks软件对各阳性条带的密度进行测量，测得的bcl-2和bax阳性条带的密度与相应的β-actin条带密度的比值作为其mRNA的相对表达量，采用SPSS11.0分析软件对实验数据进行方差分析。
2 结果
利用RT-PCR方法在正常对照组大鼠视网膜组织中，检测到了bcl-2和bax mRNA的表达。凝胶电泳结果显示bcl-2、bax和β-actin的PCR扩增片段的位置大小分别为376bp、284bp和265bp(见图1)，与利用各对特异性引物所推导的PCR扩增产物的大小相一致。bcl-2 mRNA的表达水平在缺血再灌注组大鼠视网膜组织内呈下降趋势，2h时即有明显降低，6h时降至最低，然后维持较低的表达水平至第72h，与正常对照组相比均有显著差异（P<0.01）（见图1，图2）。正常对照组海马组织内bax mRNA的表达水平较低，缺血再灌注组动物在再灌注后2h，bax mRNA的表达即有轻度增高，但与正常对照组相比无显著差异（P>0.05）。6h时bax mRNA的表达水平最高，72h时仍维持较高表达水平，与正常组相比差异显著（P<0.01）（见图1，图2）。
3 讨论
视网膜缺血再灌注损伤是眼科临床很常见的病理生理过程。大量的研究表明，视网膜缺血再灌注损伤的发病机制较为复杂，是多种因素综合作用的结果，如氧自由基的损伤、微血管的损伤、白细胞的作用和钙超载等，但是有关的分子机制尚不清楚。研究表明，视网膜在缺血再灌注损伤后，出现萎缩，视网膜细胞明显减少。视网膜细胞的减少主要是在内五层，这五层主要为神经节细胞层和内核层，其中包含的主要细胞为神经节细胞、双极细胞、无长突细胞和水平细胞［4］。缺血再灌注后，视网膜细胞的死亡包括坏死和凋亡两种方式，其中，视网膜细胞凋亡被认为是视网膜缺血再灌注损伤中神经元损伤的主要方式。
在细胞凋亡的调控过程中，bcl基因家族的表达蛋白具有重要作用［5］。其中bcl2蛋白被认为具有抗凋亡的作用，而bax蛋白则具有促凋亡的作用。本实验中，我们观察到缺血再灌注组动物视网膜组织内bcl-2 mRNA的表达在再灌注损伤2h后即明显降低，6h达到最低水平；而bax mRNA在缺血再灌注组视网膜中的表达随时间的延长呈增高趋势，6h时最高，表明在缺血再灌注组视网膜神经元中细胞凋亡抑制因子bcl2和细胞凋亡促进因子bax的比率发生了转变，这一转变可能促使视网膜神经元的凋亡，这可能是视网膜缺血再灌注造成视网膜神经元损伤的机制之一。
从本实验结果还可以看出，视网膜内bcl-2和bax mRNA的表达变化最早出现在缺血再灌注发生后的2h，6h达到高峰，提示缺血再灌注导致的视网膜神经元的损伤在早期即可发生，而且这种损伤可能与视网膜缺血再灌注后视网膜神经元中bcl-2的表达受到抑制和bax的表达增强有关。当然，细胞凋亡是一个复杂的过程，受到多种细胞凋亡基因的调控，如caspase家族、一氧化氮、兴奋性氨基酸、自由基等［6,7］。上述因子在缺血再灌注所致的视网膜神经元凋亡的过程中发挥怎样的相互作用，与bcl基因家族之间的作用关系如何，还需开展深入研究。探索缺血再灌注时视网膜神经元发生凋亡的分子机制，有助于我们通过对细胞凋亡途径的关键靶点进行干预，减轻视网膜神经元损伤，最大限度地保护视网膜的功能，因此具有重要的临床应用前景。
【参考文献】
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