2  结果

　　2.1  豚鼠近视眼模型

　　眼罩遮盖10 d后，豚鼠遮盖眼眼轴延长，近视形成。其屈光度与自身对照眼、正常对照眼相比，差异有统计学意义（P<0.05）；遮盖眼眼轴长度为（8.42±0.14）mm，与自身对照眼、正常对照眼相比，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

　　2.2  视网膜Müller细胞近视因子mRNA表达变化

　　甲醛变性凝胶电泳显示：正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞的总RNA电泳均有28S、18S和5S条带，且28S和18S条带清晰、无弥散，28S条带的亮度约是18S的2倍，表明所提取的RNA完整（见图1）。正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞RNA的OD260/280为1.93、1.89、1.91，证明所提取的RNA无污染。

　　RT-PCR检测显示：正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼的视网膜Müller细胞均阳性表达nNOS、bFGF、TH、TGF-β的mRNA，且nNOS、bFGF和TGF-β mRNA在遮盖眼表达上调，TH mRNA在遮盖眼表达下调，分别与正常对照眼、自身对照眼比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；iNOS mRNA在正常对照眼和自身对照眼视网膜Müller细胞中均不表达，但阳性表达于遮盖眼；正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼的视网膜Müller细胞均未检测到eNOS、RALDH和ALDH的mRNA（见表3、图2）。

　　3  讨论

　　Müller细胞是视网膜内最主要的神经胶质细胞，呈细长形，自外界膜纵向伸展至内界膜，胞体位于内核层。其胞体向近端伸展的突起终止视网膜内界膜毗邻玻璃体；顶突起向远端伸展，终止于光感受器层；胞体主干伸出许多侧突，穿行于神经元之间并附着于神经元胞体或树突，包绕视锥细胞、视杆细胞、双极细胞、水平细胞、神经节细胞等。从其解剖特点可看出，Müller细胞及其突起广泛分布于视网膜各类神经元胞体和纤维之间，使之能够与视网膜三级神经元构成“神经元－神经胶质”调控网络，在视网膜的功能活动中发挥重要作用，包括支持和营养神经元，维持细胞外离子稳定，参与谷氨酸循环及突触传递，感受神经元信号和调节神经元活动等[9]。但是，目前尚不明确视网膜Müller细胞与近视眼发生的关系。

　　近视眼发病机制的研究是眼科领域的研究热点之一，目前已公认近视眼的发生是在视网膜调控下巩膜主动重塑的结果。近视眼动物模型主要有两类：形觉剥夺性近视眼和光学离焦性近视眼。在眼罩遮盖、眼睑缝合或戴凹透镜后，视网膜感受外界视觉环境的变化，并产生近视信号因子，作用于视网膜色素上皮和脉络膜，使之产生下一级信号因子，进而调控巩膜的生长代谢，导致眼轴延长，形成近视眼[1]。大量研究证实，视网膜对近视眼发生的调控，与其合成、分泌一些信号因子（如DA、NO、RA、bFGF、TGF-β等）密切相关。近视眼发生过程中，视网膜NO、RA、TGF-β和夜间bFGF的含量升高[3-6]，而DA含量下降[2]，这些信号因子共同构成近视眼的视网膜神经调控网络，影响着近视眼的发生、发展。视网膜的细胞成分比较复杂，包括光感受器细胞、双极细胞、水平细胞、无长突细胞、神经节细胞、Müller细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、血管内皮细胞、周细胞等，目前尚不清楚究竟是哪些细胞通过分泌这些近视信号因子，参与近视眼的发生、发展。

　　许多研究发现，视网膜Müller细胞能合成、分泌多种神经活性物质及信号因子。Kubrusly等[10]报道了视网膜Müller细胞能表达DA受体和TH，参与视网膜DA代谢。视网膜Müller细胞还能合成bFGF[11]、TGF-β[12]、NO[13]、nNOS[14]和iNOS[13-14]。本研究中，我们原代培养豚鼠正常对照眼、自身对照眼和近视眼视网膜Müller细胞，采用RT-PCR检测TH、  iNOS、nNOS、eNOS、RALDH、ALDH、bFGF和TGF-β的mRNA表达变化，研究视网膜Müller细胞与近视信号因子基因表达的关系。结果显示，对照眼和近视眼视网膜Müller细胞均表达TH、nNOS、bFGF和TGF-β的mRNA，且TH mRNA在近视眼表达下调，nNOS、bFGF和TGF-β mRNA在近视眼中表达上调；iNOS mRNA仅在近视眼视网膜Müller细胞中表达；豚鼠视网膜Müller细胞不表达eNOS、RALDH和ALDH mRNA。众所周知，TH是DA的合成酶，iNOS、nNOS和eNOS是NO的合成酶，RALDH和ALDH是RA的合成酶。由于nNOS、iNOS、TH、bFGF和TGF-β mRNA在豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中的表达变化，与近视眼发生过程中视网膜NO、DA、bFGF和TGF-β的变化趋势是一致的，因此Müller细胞是豚鼠近视眼视网膜信号因子NO、DA、bFGF和TGF-β的一个重要来源，在近视眼发生过程中Müller细胞可能通过合成、分泌这些近视信号因子，参与近视眼的视网膜神经调控网络。在豚鼠视网膜Müller细胞中未检测到RALDH和ALDH 的mRNA，表明豚鼠视网膜Müller细胞可能不能合成RA或两者在Müller细胞中的表达量低于RT－PCR的检测水平，因此近视眼视网膜RA的表达上调可能主要来源于其他的视网膜细胞。

　　总之，nNOS、iNOS、TH、bFGF和TGF-β mRNA在原代培养的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中表达上调，TH mRNA表达下调。在豚鼠近视眼发生过程中，Müller细胞是视网膜信号因子NO、DA、bFGF和TGF-β的一个重要来源， Müller细胞可能通过合成、分泌这些近视信号因子，调控近视眼的发生、发展。

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