作者：赵莼，罗敏，计菁，王志良，施沃栋，范先群 作者单位：上海交通大学附属第九人民医院 眼科，上海 200011
【摘要】 目的 应用1%过碘酸钠和眼底YAG-532倍频激光制作接近临床状态的年龄相关性黄斑变性的兔动物模型。方法 选用健康成年青紫蓝兔10只，美多丽散瞳后在全麻状态下行左眼眼底激光光凝，同时按40 mg/kg的剂量自兔耳缘静脉注入1%过碘酸钠溶液，考虑动物的生存质量，模型动物右眼均未予处理。建模后第2周和第1个月，分别观察动物眼底、眼底荧光素血管造影(fluoresscence fundus angiography，FFA)、动物视网膜电流图、眼部光学相干断层扫描(OCT)以及视网膜组织切片的改变。结果 模型动物中除1例意外死亡外，其余生存状态均良好。建模后第2周，模型动物眼底有新生血管长出，FFA检查可见荧光渗漏；OCT检查见脉络膜新生血管处色素上皮层增厚；组织切片HE染色可见视网膜色素上皮层厚度变薄，颜色稍深；视网膜色素上皮已有萎缩，视网膜电流图检查可见波幅明显降低。建模后第1个月，眼底荧光渗漏较第2周时减少，OCT检查见新生血管处色素上皮结构破坏，上方视网膜变薄；视网膜组织切片可见色素上皮层厚度明显减少；视网膜电流图检查基本呈痕迹型。结论 本模型制作方法简单易行，成功率高，同时有明确的视网膜色素上皮萎缩及脉络膜新生血管形成，是比较接近人类年龄相关性黄斑变性特征的动物模型。
【关键词】 年龄相关性黄斑变性；动物模型；激光光凝
Establishment of a rabbit model for age-related macular degeneration with a drug and lasers
ZHAO Chun， LUO Min ， JI Jing， et al.
Department of Ophthalmology， the Ninth Affiliated Hospital of Shanghai Jiaotong University， Shanghai China， 200011
［Abstract］ Objective To use 1% iodine sodium and YAG-532 lasers to establish an animal model of age-related macular degeneration which is close to the clinical condition. Methods Ten healthy adult chinchilla rabbits were selected. Retinal photocoagulation was induced in the left eyes after mydriasis with tropicamid under general anesthesia， then 1% iodine sodium was injected in the vein of the rabbits at a dose of 40 mg/kg at the same time； their right eyes were not treated. Changes in the retina， FFA， ERG， OCT and histological sections were observed after two weeks and one month. Results After two weeks， neovascular growth can be observed and there was obvious fluorescence leakage by FFA. Atrophy of the retinal pigment epithelium could be seen， and there was an obvious reduction in the amplitude of the ERG wave. After one month， fluorescence leakage was reduced in FFA， the RPE structure of the CNV was destroyed in the OCT，the results of the ERG presented with an extinguished wave and a reduction in the thickness of the pigment epithelium could be seen in the retinal specimen. Conclusion The establishment of an animal model is simple and feasible with a high success rate. Only one rabbit died， and the other nine rabbits were healthy. Among them， choroidal neovascularization and retinal pigment epithelial atrophy was definitive. This is the closest animal model to age-related macular degeneration in human beings.
［Key words］ age-related macular degeneration； animal model； laser photocoagulation
年龄相关性黄斑变性（age-related macular disease，AMD）是发达国家老年人群中的首位致盲眼病[1]，其临床和病理特征包括黄斑区脉络膜、Bruch膜和视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）层复合体的病变，玻璃膜疣的产生、色素上皮萎缩、光感受器减少或者丧失、脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）以及视网膜下纤维瘢痕形成，导致中心视力下降或者丧失。随着我国社会人口的老龄化，AMD的发生率也在逐年提高，尤其是经济发达的上海市，致盲眼病的疾病谱正在发生改变，视网膜疾病可能取代白内障等眼病成为首位致盲眼病[2]，AMD尤其是湿性AMD将会是50岁以上人群中一种严重危害视力的眼病。因此，建立理想的动物模型可为进一步研究AMD的发病机制、病理改变及临床治疗提供帮助，对于该病的研究具有非常重要的临床意义。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
健康成年无眼病青紫蓝兔10只，体重2.5~3.0 kg，雌雄不分(由上海交通大学医学院动物实验中心提供)。适应性分笼圈养1周，观察其活动情况，双眼跟随反应无异常者纳入实验。
1.1.2 药物和试剂
美多丽眼液（复方托吡卡胺，参天制药株式会社），0.4％倍诺喜滴眼液（参天制药株式会社），10％荧光素钠注射液（广西梧州医药股份有限公司），1%过碘酸钠溶液（美国sigama公司），眼球固定液（复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼病理科配制）。
1.1.3 仪器
YAG-532倍频激光机（美国IRIS公司），NF-505型荧光眼底血管造影仪（日本Nikon公司），SPECTRALIS-OCT(德国海德堡公司)，LKC-3000型视觉电生理诊断系统（美国LKC公司）。
1.2 动物模型的制作
1.2.1 激光诱导CNV的产生
用美多丽眼液对左眼充分散瞳，倍诺喜眼液表面麻醉后在全视网膜镜下用倍频激光(波长532 nm)在视乳头髓线上方光凝24个点（4×6），光斑间隔50 μm。光凝的激光能量为700 mW，光斑直径75 μm，曝光时间0．1 s。实验动物右眼未作任何处理。
1.2.2 药物导致视网膜色素上皮萎缩
激光光凝后2 h，将1%过碘酸钠溶液按40 mg/kg的剂量自兔耳缘静脉缓慢注入。
1.3 眼部观察
1.3.1 眼底检查
激光光凝后第14天、第1个月行左眼眼底彩色照相、眼底荧光血管造影（fluoresscence fundus angiography，FFA）检查。FFA检查时麻醉散瞳同前，经兔耳缘静脉注射10％荧光素钠注射液。
1.3.2 视觉电生理检查
实验动物激光光凝前、光凝后第14天、第1个月，分别行双眼视网膜电流图(electro retinogram，ERG)检查，将动物全身麻醉后安放角膜接触电极，参考电极置于额部正中皮下，接地电极置于双耳后皮下。调整兔眼距屏幕的检测距离为30 cm，暗适应30 min后开始记录。
1.3.3 组织病理学检查
所有实验动物在观察结束后处死，取下左眼眼球，将角膜缘戳孔后放入眼球固定液中固定，24 h后依次梯度脱水并行HE染色，在光镜下观察视网膜及脉络膜病理变化情况。
1.3．4 眼底OCT检查
实验动物光凝前、光凝后第14天、第1个月，分别行左眼OCT检查。扫描方式为通过激光光斑处面扫，扫描线段长6 mm，扫描深度870 μm，横向和纵向分辨率均为6 μm/pixel，扫描速度40000 Hz/s。
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