2  结果

　　2.1  一般情况

　　所有实验动物除1例意外死亡外，其余均正常存活， 无眼部感染及其他并发症。注射过碘酸钠溶液2~3 d后，所有动物均出现不同程度的厌食及烦躁，考虑为视力下降所致，未予特殊处理，数日后均自行好转。

　　2.2  眼底改变

　　实验动物光凝时，光斑中央有气泡形成，无出血；光凝及注药后观察眼底见光斑中央为浓白色（见图1），眼底荧光造影未见荧光渗漏。随时间推移，视网膜色素上皮逐渐萎缩，眼底高荧光较前增强，且光斑处出现荧光渗漏。造模后第14天，眼底荧光造影见激光光斑处显示为高荧光，并有明显荧光素渗漏（见图2）。造模后第1个月，眼底检查可见光斑中央有新生血管长出，但眼底荧光造影仅见激光光斑处有少量荧光渗漏，较第14天时明显减少（见图3）。

　　2.3  视觉电生理改变

　　实验动物光凝及注药前ERG检查显示，a波、b波、ops波各项波型均存在，振幅正常（见图4）。第14天检查显示，ERG的a波、b波波型依然存在，但振幅明显降低，潜伏期延长，左眼由于同时受药物和激光双重作用，波形下降更为明显，ops波已基本消失（见图5）。造模后第1个月，ERG各项波型已基本消失，为痕迹型（见图6）。

　　2.4  组织病理学检查

　　正常兔视网膜组织切片HE染色可见：视网膜色素上皮层厚度正常，颜色呈淡紫色（见图7）。第14天时，模型动物视网膜色素上皮层厚度变薄，颜色稍有加深（见图8）。第1个月时，模型动物视网膜切片可见色素上皮层厚度明显变薄，颜色进一步加深（见图9）。

　　2.5  眼底OCT检查

　　正常兔眼底OCT检查可见视网膜色素上皮层光带完整，未见新生血管（见图10）。造模后第14天，OCT检查可见脉络膜新生血管处色素上皮层增厚，反射信号增强，上方视网膜隆起增厚（见图11）。造模后第1个月，OCT显示新生血管处视网膜色素上皮结构紊乱，反射增强，上方视网膜萎缩变薄（见图12）。

　　３  讨论

　　年龄相关性黄斑变性在临床上分为干性和湿性两型：其中干性又称非渗出性，以黄斑区地图状萎缩为特征；而湿性又称渗出性，以脉络膜新生血管(CNV)形成为特征。本实验联合药物和激光共同作用，旨在构建既存在视网膜色素上皮萎缩又有脉络膜新生血管的动物模型，同时采用眼球大小和视网膜结构都与人近似的青紫兰兔作为动物模型，从而使之尽量符合人类年龄相关性黄斑变性的病理改变。

　　目前，建立CNV动物模型的方法有很多，各有优缺点。如Ccl-2／Ccr-2基因缺失的小鼠诱导的CNV模型与人类年龄相关性黄斑变性的CNV产生的病程、解剖、病理改变非常接近，但该种实验动物需经基因敲除，费用昂贵，且模型成功率较低[3]。采用激光诱导造模的方法被广泛应用。由此方法产生的CNV与人类AMD引起的CNV有很多共同之处。首先，组织来源相同，眼底激光诱导产生的CNV血管内皮细胞同样源于脉络膜毛细血管；其次，病理基础也相同，都是由脉络膜毛细血管-Bruch膜-视网膜色素上皮复合体损伤导致血管生成因子与抑制因子间平衡的破坏，使内皮细胞发生增生、移行和管腔形成等一系列新生血管形成过程[4]。目前较常使用的有氩、氪激光，本实验采用的倍频Nd：YAG激光与氩离子激光作用相似。在一定波长范围内，随着激光波长的增加，其组织穿透能力增加，可更多地作用于脉络膜组织。

　　视网膜色素变性的制作则通常选用过碘酸钠溶液注射，通过静脉注射过碘酸钠可引起视网膜色素上皮萎缩甚至坏死。江伟等[5]研究发现：过碘酸钠诱导的PRE细胞凋亡受剂量和时间的双重影响，视网膜坏死程度与注射后时间及注射量呈正相关。剂量为30～40 mg/kg的过碘酸钠适用于非渗出性年龄相关性黄斑变性的体内造模。本实验采用40 mg/kg的剂量注射，14 d后即可见ERG改变，同时组织病理学切片可见色素上皮萎缩，与文献报道一致。

　　视网膜电流图（ERG）被广泛地应用于眼科临床和动物实验的研究中，其中暗适应ERG为标准化ERG中的一个主要项目，它记录视网膜的最大电反应，为全视网膜视椎和视杆电反应的总和[6]。过碘酸钠是一种选择性作用于视网膜色素上皮层的药物，在本实验动物静脉注射碘酸钠14 d后，ERG的a、b波峰延迟，振幅下降。1个月后，视网膜色素上皮层明显萎缩变薄，导致色素上皮-光感受器复合体严重受损，ERG最终呈痕迹型，进一步验证了视网膜色素上皮变性的病理基础。

　　眼底荧光血管造影（FFA）对诊断视网膜血管疾病和视网膜色素上皮病变具有重要的临床价值[7]。由于FFA能够反映眼底血管形态，揭示病变性质，同时可在同一动物身上多次重复使用从而实现连续动态的观察，因此在AMD的诊断和治疗中具有不可替代的作用。干性AMD的FFA表现为：玻璃膜疣处出现强荧光，且随着玻璃膜疣的增大，延迟出现的强荧光现象越明显。湿性AMD由于新生血管的形成则表现为：早期黄斑部出现典型的CNV轮廓，呈颗粒状、斑片状或车轮状，随后迅速出现荧光渗漏并互相融合，形成边界模糊的强荧光区，后期脉络膜背景荧光消退后该处仍持续呈强荧光[8]。本组动物光凝后行FFA检查示：背景呈高荧光，造模时间越长，背景荧光越亮。光斑有荧光渗漏，随造影时间逐渐扩大并相互融合，形态与人类AMD眼底造影相似。

　　OCT是一种新的、非穿透性的、对视网膜的横切面进行断层扫描的技术，它可以分辨不同形态、性质的病变。对于渗出性的脉络膜新生血管膜，OCT可以对新生血管膜形态进行定量和定性测量，了解新生血管膜的边缘是否清晰，以及是否有色素上皮脱离及视网膜水肿，并可监测新生血管膜的发展[9]。本研究中正常实验动物色素上皮层完整，视网膜结构正常。激光造模后第14天，OCT检查可见新生血管处色素上皮层反射增强，视网膜隆起增厚。随时间推移，上方视网膜萎缩，第1个月时OCT检查可见新生血管处视网膜结构破坏，断面可见激光光斑处视网膜变薄，与眼底荧光造影改变一致。

　　综上所述，年龄相关性黄斑变性病理改变复杂，动物模型多种多样，各有优劣。本实验选择了与人眼大小相似且同样具有视网膜色素上皮的青紫蓝兔作为模型动物，联合1%过碘酸钠和激光共同作用，破坏视网膜色素上皮层，诱导产生新生血管，更加符合老年人黄斑变性的发生机制。该方法制造的动物模型不论从形态上还是从功能上都鉴定到与人类年龄相关性黄斑变性相似的病理改变发生，且动物模型制作过程简单，易重复，实验动物容易获得，成功率高，是比较理想的年龄相关性黄斑变性的动物模型。但是，该研究也存在一定的不足，例如对于1%过碘酸钠和激光均是采取统一用量，没有进行分组量化，目前仍在继续研究中。

　　【参考文献】

　　[1] McCarty CA， Mukesh BN， Fu CL， et al. Risk factors for age-related maculopathy： the visual impairment project[J]． Arch Ophthalmol，2001，119（10）：1455-l462.

　　[2] 邹海东，张皙，许迅，等. 上海市静安区曹家渡街道年龄相关性黄斑变性的患病率调查[J]. 中华眼科杂志，2005，4（1）：15-19.

　　[3] 杨秀梅，王雨生． 脉络膜新生血管的动物模型[J]． 国际眼科纵览，2006，30（3）：166-170.

　　[4] Criswell MH， Ciulla TA， Hill TE， et al. The squirrel monkey： characterization of a new-worn mate model of experimental choroidal neovaseularization and comparison with the macaque[J]． Invest Ophthalmol Vis Sci，2004，45（2）：625-634.

　　[5] 江伟，张婉玉，邱春亿. 碘酸钠诱导非渗出型年龄相关性黄斑变性模型的研究[J]. 国际眼科杂志，2008，8（8）：1504-1510.

　　[6] 李海生，潘家普. 视觉电生理的原理与实践[M]. 上海：上海科学普及出版社，2002：113.

　　[7] 文峰. 努力提高眼底血管造影的临床释义水平[J]． 中华眼底病杂志，2000，16（1）：2.

　　[8] Bird AC， Barnes RM． Age-related macular disease：an ongoing challenge[J]． Clin Exp Ophthalmol，2003，31(6)：461-463.

　　[9] 李永，高岩，戴虹，等. 光学相干断层扫描对年龄相关性黄斑变性及脉络膜新生血管膜的诊断意义[J]. 美中国际眼科杂志，2001，1（2）：20-22.

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