周庆军   杨玲玲   曲明俐   王瑶   王宜强   董晓光   谢立信

山东省眼科研究所   266071

目的：通过构建小鼠碱烧伤角膜新生血管模型，研究角膜基质细胞的状态改变，及其对角膜新生血管的调控作用。

方法：采用NaOH滴眼构建Balb/C小鼠角膜新生血管模型，术后不同时期取眼球，行β-半乳糖苷酶染色和免疫组化染色；分离培养角膜基质细胞，通过H2O2诱导建立角膜基质细胞的应激型衰老模型，通过细胞连续传代构建角膜基质细胞的复制性衰老模型，行定量PCR、免疫细胞化学、ELISA检测，并与血管内皮细胞共培养检测其对血管内皮细胞增殖、迁移和成管能力的影响。

结果：碱烧伤14天时，小鼠角膜新生血管生长最为旺盛，β-半乳糖苷酶染色发现此时角膜基质内存在有大量衰老的基质细胞，并与血管内皮细胞伴行，在体免疫组化和体外细胞分离培养都证实了衰老细胞为角膜基质细胞。通过H2O2处理和细胞连续传代，构建了应激衰老和复制性衰老两种衰老细胞模型，检测发现，与正常角膜基质细胞相比，衰老基质细胞能分泌更多的VEGF和基质金属蛋白酶，从而进一步促进了血管内皮细胞的增殖、迁移和成管能力。

结论：碱烧伤造成的角膜新生血管形成过程中存在有衰老的角膜基质细胞，通过促进血管内皮细胞的增殖、迁移和成管能力，调控着角膜新生血管的发生发展过程。