周善璧   费春梅   胡文静

重庆医科大学附属第一医院   400016

目的：探讨RNA干扰对血管内皮细胞（ECs）中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及大鼠碱烧伤后角膜新生血管（CNV）是否具有抑制作用。

方法：用DNA重组技术设计合成针对VEGF mRNA的3条shRNA寡核苷酸片段，构建真核表达质粒VEGF shRNA1、2、3，然后将质粒通过脂质体介导分别转染ECs，RT-PCR和Western blot分别检测ECs中VEGF mRNA和蛋白的表达及干扰效率，并筛选出干扰效率最高的质粒（VEGF shRNA3质粒）进行体内实验。建立大鼠碱烧伤后CNV模型，实验组于结膜下注射VEGF shRNA3质粒后，显微镜下观察CNV生长情况，7天后利用RT-PCR及Western blot分别检测角膜组织VEGF mRNA和蛋白的表达。

结果：经酶切及测序证实重组质粒构建成功。VEGF shRNA1、2、3质粒均可下调VEGF mRNA和蛋白的表达，其中VEGF shRNA3质粒的抑制作用较强，VEGF mRNA和蛋白的抑制率分别为68.92%和66.22%。体内实验中实验组CNV面积明显减少，VEGF mRNA 和蛋白在角膜组织中的表达明显降低，抑制率分别为41.84%和41.86%。

结论：构建的VEGF shRNA质粒能有效抑制ECs中VEGF mRNA和蛋白的表达。结膜下注射VEGF shRNA3质粒能显著抑制碱烧伤后CNV的形成及VEGF的表达。