曹文萍   王晓媛   刘平

哈尔滨医科大学第一临床医院眼科医院   150001

目的：构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系，为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供试验基础。

方法：应用重叠延伸PCR法定点诱变，构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体，以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮细胞HCE，WesternBlot法检测转染后培养基中HCE分泌的TGFBI蛋白的表达。

结果：经克隆、酶切、测序证实了获得A546D突变型TGFBI基因，并准确插入到pcDNA3.1载体中，野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后，TGFBI蛋白有效表达。

结论：成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体，为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。