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2 结果
正常角膜上皮细胞有VEGF mRNA表达，琼脂糖凝胶电泳分析结果显示VEGF mRNA在无血清的DMEM培养基培养组(Ⅰ组)和去上皮的羊膜培养液组(Ⅱ组)中均有表达，在以未去上皮的羊膜培养液组(Ⅲ组)及单纯去上皮羊膜底物培养皿接种组(Ⅳ组)中表达均受到了明显的抑制(P<0.01，n=5)。
3 讨论
角膜新生血管(neovascularization, NV)常由损伤、炎症、感染、多次角膜眼表手术及各种病理原因所致，这包括各种热化学烧伤及各种炎症刺激。随着眼表重建术的广泛开展，一些严重结角膜疾病所致眼表损伤后的角膜新生血管，已经逐渐成为困扰人们的主要问题。新生血管的形成，为创面的愈合提供了有利的条件，然而大量的新生血管在损伤愈合后，会使角膜失去其特有的光学特性，严重的角膜新生血管化会导致视力下降甚至视力丧失;新生血管的长入使角膜失去相对免疫赦免地位，增加了角膜移植手术排斥反应的发生几率。目前虽有多种治疗方法，但效果均不理想。因而寻找简单、有效的治疗方法，是目前眼科面临的课题之一。临床上羊膜角膜移植及羊膜移植眼表重建，均显示其有抑制角膜新生血管的作用[1]，然而具体作用机制仍不十分明确。最近，我们的研究表明[4]，培养羊膜的上清液可明显地抑制角膜新生血管化，并观察到其可能通过抑制血管内皮细胞的生长和迁徙来抑制角膜新生血管形成。另外，Tseng等[5]的一项研究显示，羊膜基质可以抑制角膜和角膜缘成纤维细胞中TGF家族及其受体的表达，提示羊膜可以调控培养于其上角膜细胞的基因表达与行为。我们对体外培养的角膜上皮细胞研究发现，血管活化因子VEGF在正常角膜上皮细胞中均有表达，提示兔角膜上皮细胞可能参与了角膜新生血管的形成或调控。血管内皮细胞生长因子VEGF可刺激多种血管内皮细胞的生长、增殖、迁徙移行，并刺激血管基质细胞分泌细胞外基质，刺激新生血管增生[6]。参与调控多种新生血管形成与增殖，如角膜新生血管化、视网膜下新生血管化的形成及在各种肿瘤的新生血管化的形成中均起着非常重要的作用。其在活跃的新生血管组织及器官，活性也明显增强。在临床中，Tseng等[5]提倡使用保存的羊膜作为移植物，保存的羊膜上的上皮细胞经过反复处理其所具有的作用会大大下降，而临床羊膜移植物一般自然溶解可能需要2wk左右。这样一段时间，羊膜细胞中产生的那些抗炎抗血管形成的物质会被消耗掉。但据临床观察，用保存的羊膜进行移植一样也可获得较好的疗效。为了说明这种现象，我们设计了Ⅳ组，即将兔角膜上皮细胞直接培养在去掉上皮层的羊膜上(羊膜已冷冻保存6mo)，考察其对角膜上皮细胞中VEGF mRNA表达影响。我们发现其与前几组比较，VEGF的表达则受到了明显的抑制。这可能与羊膜基底膜和致密层的生物学特性有很大关系。羊膜的基底膜主要由Ⅳ型胶原，Ⅶ型胶原和层粘连蛋白组成。虽然基底膜中Ⅳ型胶原的α2链与结膜基底膜相同，而无角膜上皮基底膜中Ⅳ型胶原的α5链，但层粘连蛋白1，层粘连蛋白5，纤维连接蛋白和Ⅶ型胶原的成分与角膜基质中的成分是相同的[2]。因此，羊膜的基底膜提供了一个远比其它媒介物质更接近正常眼表成分的微环境，这不但可以促进角膜上皮的生长，而且基底膜中的细胞外基质成分具有抗新生血管形成及抗炎的作用，这也可能是为什么Ⅳ组的角膜上皮细胞中VEGF的表达受到明显抑制的原因。
由于羊膜细胞(尤其是羊膜上皮细胞)能够产生大量的生长因子及抗炎、抗血管生成因子成分，具有抗炎、抗新生血管的作用，因此，我们建议可以在羊膜移植中尽量保留其上皮细胞成分，也许这更有利于羊膜移植后的眼表功能重建。另外，羊膜培养液对角膜新生血管的抑制作用可能为目前眼科临床提供一种简单，有效的治疗方法。
【参考文献】
1 Tseng SCG, Prabhasawat P, Barton K, et al. Amniotic membrane transplantation with or without limbal allografts for corneal surface reconstruction in patients with limbal stem cell deficiency. Arch Ophthalmol 1998;116(4):431441
2 Fukuda K, Chikama T, Nakamura M, et al. Differential distribution of subchains of the basement membrane components type IV collagen and laminin among the amniotic membrane, cornea, and conjunctiva. Cornea 1999;18(1):7379
3 Hao Y, Ma DH, Hwang DG, et al. Identification of antiangiogenic and antiinflammatory proteins in human amniotic membrane. Cornea 2000;19(3):348352
4 马翔,Haydee Bazan,李军.羊膜培养液抑制角膜新生血管的实验研究.中华眼科杂志 2003;39(12):753756
5 Tseng SC, Li DQ, Ma X. Suppression of transforming growth factorbeta isoforms TGF receptor type II, and myofibroblast differentiation in cultured human corneal and limbal fibroblasts by amniotic membrane matrix. J Cell Physiol 1999;179(3):325335
6 Amano S, Rohan R, Kuroki M, et al. Requirement for vascular endothelial growth factor in wound and inflammationrelated corneal neovascularization. Invest Ophthalmol Vis Sci 1998;39(1):1822 上一页 [1] [2] |
