彭瑞萍 戚朝秀 高莎莎 赵玉新 刘臻臻 商福 吴明星
中山大学附属第三医院眼科 中山大学中山眼科中心 TUFTS大学营养与视觉实验室 510060
目的:研究重组腺病毒负显性表达K6W泛素(RAD-K6W)对兔后发性白内障及体外培养的晶状体囊袋模型中晶状体上皮细胞(LEC)的增殖作用的影响,探讨用于后发性白内障的可能性。
方法:新西立家兔24只随机分为4组,每组6只,行双眼晶状体超声乳化吸除术,每组右眼分别前房注射含(实验组Ⅰ).4X105ifu、(实验组Ⅱ).6x105ifu、(实验室组Ⅲ)1.1x106ifu(实验组IV)2.2X106ifu量的RAD-k6w,左眼前方注射相同量的空病毒载体(RAD)的稀释液0.5ml(对照组)。术后1d、3d、5d、7d、13d、15d散瞳后观察后囊膜并拍照,采用POCOman软件对后囊膜浑浊程度进行半定量分析。2周后分别取出囊袋进行组织学观察,并进行western blotting检测泛素、aB晶状体蛋白和a-平滑肌肌动蛋白的表达,免疫荧光观察a-平滑肌肌动蛋白的表达。另取新西兰家兔4只双眼囊袋体外培养并观察,方法同上。
结果:兔晶体后发性白内障模型经POCOman评分Ⅰ、Ⅱ组双眼无统计学差异,第Ⅲ组术后1d、3d双眼无统计学差异,5d7d11d15d右眼评分明显低于对照眼,有统计学差异,第ⅠⅤ组出现明显的角膜内皮水肿至2W左右消失,晶状体囊袋右眼评分左眼有统计学差异。组织学染色显示实验组晶状体上皮细胞均明显少于对照组。转染后实验组泛素表达上调,aB晶状蛋白和a-平滑肌肌动蛋白表达下调。体外培养的晶状体囊袋模型中晶状体上皮细胞殖明显受到抑制。
结论:重组负显性K6W泛素在体外培养的囊袋模型和后发性白内障模型中对兔晶状体上皮细胞增殖有较明显的抑制作用,并下调aB晶状体蛋白和a-平滑肌肌动蛋白的表达。 |