蒋永祥 卢奕 杨晋

　　复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科 200031

　　目的：探讨Cre/LoxP增强型人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503诱导的自杀基因系统在HLEC中的特异性表达。

　　方法：构建Cre/LoxP增强型HLEC特异性启动子LEP503诱导的自杀基因系统。分别以HLEC，视网膜色素上皮细胞(RPEC)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)，293T细胞为实验组，转入Cre/LoxP增强型特异性自杀基因系统，三天后荧光显微镜观察四组细胞荧光表达强度，并收集HLECs和RPECs作RT-PCR 检测HSV-tk 的表达差异。20μg/ml丙氧鸟苷(GCV)作用72、96小时后，以广谱表达载体为对照，CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk/GCV系统对HLECs和RPECs的杀伤作用。

　　结果：Cre/LoxP增强型特异性自杀基因系统在NIH3T3、293T、RPECs中均表达EGFP;在HLECs中弱表达EGFP。RT-PCR检测显示HLECs内有较高的HSV-tk表达20μg/ml GCV作用96小时后流式细胞仪检测：HLEC组的细胞杀伤效率为76.51%，而RPEC组仅为2.24%。CCK-8试剂盒检测细胞的增殖抑制情况显示：20μg/ml GCV作用72小时后Cre/LoxP增强型特异性自杀基因系统感染的RPEC活性与正常RPE组和阴性对照RPE组相比，差异无统计学意义;但与广谱表达载体组比较，广谱表达载体组RPECs活性明显抑制，两者相比，差异有统计学意义。

　　结论：增强型HLEC特异性启动子LEP503诱导的自杀基因系统在HLEC中特异性表达HSV-tk，GCV作用后可选择性抑制HLECs增殖，但对RPECs无明显杀伤作用。