夏晓波 张枥心
中南大学眼科研究所 中南大学湘雅医院眼科 410008
目的：研究缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷胺酰胺合成酶GS与谷氨酸转运体GLAST的调控作用。
方法：(1)采用组织块培养方法培养出生后7-10天(P7-10)小鼠视网膜Müller细胞。(2)实验分组：①缺氧干预组：CoCl2在培养鼠视网膜Müller细胞中加入CoCl2进行缺氧干预6h、12h、18h、24h、48h、72h;②对照组：按含20%胎牛血清的DMEM进行常规培养。(3)采用免疫细胞化学染色方法检测Müller细胞GS与GLAST蛋白质表达的变化。(4)RT-PCR方法分析Müller细胞谷氨酸转运体GS mRNA与GLAST mRNA表达的差异。
结果：(1)免疫细胞化学显示GS、GLAST蛋白定位于视网膜Müller细胞胞浆和胞膜中。随着缺氧时间的延长，干预组Müller细胞内GS和GLAST蛋白质表达量均逐渐增加，当缺氧时间为24h时，GS、GLAST蛋白的表达量达到最大，明显高于对照组(P<0.05)。(2)随着缺氧时间的延长，GS 和GLAS T mRNA表达量均逐渐增加，当缺氧时间达到为24h时，GS 和GLAST mRNA表达量达到最大，较对照组有明显的增加(P<0.05)。随后随着时间的延长，二者mRNA的表达量出现下降趋势，并在72h表达最弱。
结论：在一定时间范围内缺氧可上调视网膜Müller细胞GS、GLAST mRNA和蛋白质的表达，从而可能增加视网膜Müller细胞谷胺酰胺合成酶和谷氨酸转运体活性。 |
