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3 讨论
RPE位于神经视网膜的最外层，是血视网膜屏障的重要组成部分，对维持视网膜的正常功能至关重要。光、缺血、缺氧、外伤等因素造成的视网膜损伤，以及继发于这些损伤的疾病，如增生性玻璃体视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等都可导致RPE的损害，是影响视功能的常见原因。因此，影响RPE细胞移行、增生的因素，以及如何有效干预RPE的损伤修复过程一直是人们研究的热点。内源性的电场产生于上皮组织损伤后，在组织发生、组织损伤修复过程中均发挥重要作用。外加电场可诱导角膜上皮细胞、晶状体上皮细胞、角质细胞以及神经元等产生朝向阴极或阳极方向的定向移行或生长，并证明可促进角膜、皮肤上皮的损伤愈合[8]。本结果表明，外加电场可诱导hRPE细胞朝向阴极方向的移行，从而为人为干预hRPE细胞的移行过程提供了新的思路。然而，电场对hRPE细胞正常活力和细胞分裂过程是否产生负面影响尚未可知，这对于能否进一步将电场用于在体研究至关重要。因此有必要观察我们所采用的实验条件下电场对hRPE细胞生物学活性的影响，为后续研究提供依据。
由于跨RPE的电势大小约为10mV，RPE细胞约厚10μm，因而在RPE的缺损区周围将会产生～10V/cm的电场。本课题组先前实验表明，强度为8V/cm的电场已能够诱导明显的hRPE细胞移行，因此我们选取这一电场条件作为观察对象。实验结果表明，暴露于8V/cm电场中3h后hRPE细胞同对照组相比细胞活力相当；停止电场作用后，细胞可恢复正常形态，不仅未出现明显的凋亡现象，且维持了正常的分裂增生。这说明在本实验条件下电场对hRPE的作用是安全的。目前关于电场对细胞分裂、增生的影响尚无定论。有研究显示，角膜上皮损伤所产生的内源性电场在药物作用下增强时，角膜细胞的分裂会相应增加；电场刺激能够通过促进细胞移行和增生增加小鼠缺血肢体的毛细血管密度[9]。而对血管内皮细胞的研究则表明，大小为100～200mV/mm的电场可能通过抑制细胞周期中G1/S过渡而抑制细胞增生，认为电场对血管内皮细胞增生的影响是与电场强度的大小相关的，但同时此作用并不诱发细胞凋亡现象[10]。本实验中电场作用时间为3h，远远小于上述研究中观察选用的12h或更长时间，因此尚不能明确电场对hRPE细胞的增生是否产生促进或抑制作用。此方面正在进一步研究中。
综上所述，本实验结果表明，短时间电场作用在能够引导hRPE细胞显著定向移行的情况下，对细胞的正常活力及分裂无明显不良影响，本实验所采用的条件在在体研究中是安全可行的，使得通过电场调节hRPE的损伤修复成为可能。
【参考文献】
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9 Song B, Zhao M, Forrester JV, et al. Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo. Proc Natl Acad Sci USA2002;15;99(21):1357713582
10 Wang E, Yin Y, Zhao M, et al. Physiological electric fields control the G1/S phase cell cycle checkpoint to inhibit endothelial cell proliferation.FASEB J2003;17(3):458460 上一页 [1] [2] |
