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3 讨 论
晶状体来源于外胚层，由晶状体囊膜、前囊膜下上皮细胞及其产物—晶状体蛋白组成。晶状体上皮细胞是晶状体前囊膜下的单层上皮细胞，在一生中不断生长、增殖、分化、移行，到达赤道部后伸长、弯曲，移向晶状体内部构成晶状体纤维。晶状体上皮细胞对晶状体的生长发育和维持正常的生理状态至关重要。晶状体上皮细胞代谢、功能、形态结构的改变或异常增殖、移行，与白内障和白内障术后后发障的发生密切相关［1］。
晶状体囊膜作为屏障将晶状体上皮细胞与其它类型的细胞完全隔开，因此，晶状体上皮细胞培养既无神经和血管组织的干扰，又不受其它类型细胞的污染，可以进行单一细胞培养。人晶状体上皮细胞的培养方法［2］为在离体状态下研究晶状体的生理、病理生理、以及白内障的病因、发病机制、临床药物筛选等提供了理想的实验手段。本研究对原代人胚晶状体上皮细胞培养是采用简便的组织块培养法［3］并加以改进，由于胚龄3～4个月的人胚晶状体明显小于成人晶状体，无法完整分离晶状体囊膜，所以，我们用显微囊膜剪将完整的人胚晶状体剪成直径约1mm大小的组织块直接平贴于细胞培养瓶，利用囊膜上皮尚带有少许晶状体皮质的粘性保证了晶状体上皮细胞的贴壁生长。其原因系细胞培养所用的胎牛血清主要对晶状体上皮细胞起保护作用并刺激其增殖，另外靠其粘性可促进晶状体囊膜贴壁。此外，晶状体皮质作用有三［4］：① 含有胶原类蛋白，粘性很大，在促进囊膜贴壁上起决定作用；②其在体内是与晶状体上皮细胞紧贴的组织，培养时加入后可使晶状体上皮细胞得到类似在体内的环境条件；③其含有的一些细胞生长因子可刺激晶状体上皮细胞增殖。由于晶状体皮质和胎牛血清以很高的浓度在囊膜表面形成一个保护层，使得在维持囊膜湿润的状态下，提供了足够的时间供细胞贴壁、移出和增殖。
本实验通过对体外培养人胚晶状体上皮细胞生长情况的观测结果发现,体外培养的人胚晶状体上皮细胞成贴壁生长，原代细胞于组织块贴壁48h后从组织块边缘长出，细胞形态逐渐趋于典型的六角形，具有上皮细胞的形态特点，10h后达到融合。第二代人胚晶状体上皮细胞的形态呈六角形或椭圆形，需10h左右达到融合。透射电镜观察显示：第二代人胚晶状体上皮细胞具有正常的超微结构，细胞浆内富含线粒体、核糖体、粗面内质网及散在的溶酶体和高尔基体等结构，说明人胚晶状体上皮细胞具有丰富的代谢功能。
研究晶状体上皮细胞生长增殖能力有助于更多地了解晶状体上皮细胞所固有的各种特性。细胞增殖生长力是判定细胞活力的重要指标。Reddan等［5］研究表明，兔晶状体上皮细胞的体外增殖能力与动物年龄呈负相关，本研究取材胎龄为3～4个月因外伤而流产的人胚晶状体，通过细胞计数法观察第二代人胚晶状体上皮细胞的生长曲线，结果显示，其生长曲线近“S”形，经过1～2d的潜伏期后进入对数生长期，10d后达到生长稳定的平台期。结果表明，3～4个月人胚晶状体上皮细胞的生长增殖速度较快，容易适应体外培养。
此外，本研究显示原代培养和第二代人胚晶状体上皮细胞具有正常的极性生长特性［6］和代谢功能，而且本实验使用α晶状体蛋白进行免疫细胞化学鉴定，α晶状体蛋白是晶状体上皮细胞所特异性分泌的一种蛋白质，在其他组织中几乎不表达，所以采用α晶状体蛋白对晶状体上皮细胞进行鉴定具有较高的特异性［7］。本实验结果显示，体外培养的人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力且α晶状体蛋白表达阳性，第二代人胚晶状体上皮细胞是进行相关先天性白内障研究的合适实验对象，可为从细胞分子水平研究先天性白内障的发生机制打下基础。
【参考文献】
［1］ Newell F W. Ophthalmology principles and concept［M］. Tenth Ed. st. Louis: Mosby year book, 1991:354366.
［2］ Jacob T J. Human lens epithelial cells in culture: a quantitative evaluation of growth rate and proliferative capacity［J］. Exp Eye Res, 1987: 45(1):93104.
［3］ Ibaraki N. Human lens epithelial cell culture［J］. Methods Mol Biol, 2002,188:16.
［4］ 李秋明. 添加晶体皮质提高晶体上皮细胞原代培养成功率［J］. 眼科研究，1997, 15(1):56.
［5］ Redden J R, Dziedzic D C, Mostafapour M K, et al. Establishment and characterization of a lens epithelial cellline from an eight year old rabbit［J］. Cur Eye Res, 1983, 2(9):633639.
［6］ Saika S, Miyamoto T, Ishida I, et al. Lens epithelial cell death after cataract surgery［J］. J Cataract Refract Surg, 2002, 28(8):14521456.
［7］ Fu L, Liang J J. Alteration of proteinprotein interactions of congenital cataract crystalline mutants［J］. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2003, 44(3):11551159.
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