3 讨论

    去细胞处理的异种生物材料抗原性低，受体的细胞能够在材料上增殖而产生有活性组织[5]。猪角膜来源广泛，易于获得，脱细胞处理后仍具有天然的角膜形态，而且去除了角膜细胞、糖蛋白等抗原成分以及异种基因等遗传物质，符合组织工程技术以及医学伦理学要求。支架材料表面平滑、完整的基底膜有利于细胞贴附[6]。猪角膜的DM层主要成分为Ⅳ型胶原，与基底膜成分一致，所以本实验穿透性移植术中DM向外，光滑完整的DM起到了基底膜的作用，有利于兔角膜上皮层的基底细胞锚定与附着，促进角膜上皮层迅速修复，覆盖材料外表面，增强抗炎能力。

    角膜上皮细胞与角膜基质固有细胞间的细胞通讯（cell communication）在角膜创伤修复中起着重要作用[7]。角膜上皮细胞层修复时，释放血小板源性生长因子PDGF，激活角膜固有细胞，转化为纤维母细胞，进行有丝分裂，分泌胶原，促进角膜基质创伤的愈合[8,9]。穿透性角膜移植术后8wk HE组织学切片上，可以观察到上皮细胞层下胶原板层内纤维母细胞较早出现，而角膜内皮侧胶原板层内出现较晚。CACM与植床基质愈合部位过渡自然，只有借助保留的缝线才能加以区分。

    术后植片较扁平，缺乏角膜自然弧度，2mo后，在材料改建、眼内压的共同作用下，逐渐恢复自然弧度，与对侧角膜曲率接近，植片透明度增加。32wk时植片新生血管（CNV）明显减少，缓慢透明，可以透见瞳孔、虹膜纹理。植片透明度差与伤口修复时血管内皮细胞、纤维母细胞、淋巴细胞长入、缺乏角膜内皮层“泵”功能、消退后的CNV遗留影子血管（ghost vessels）等有关[10]。

    去细胞处理的角膜支架材料具有与天然角膜相类似的胶原排列结构，晾干处理后透明度稍差，其生物相容性良好，单纯材料可以诱导自体细胞长入，支持自体细胞三维生长，原有胶原参与改建，角膜植片恢复自然曲率，并逐渐透明。下一步研究的关键在于构建透明度较好的板层组织工程角膜，并用于灵长类动物角膜移植。

   【参考文献】
 
1谢立信,主编.角膜移植学.第1版．北京:人民卫生出版社，2000:1-2

2 Liu Y, Gan L, Carlsson DJ, Fagerholm P, Lagali N, Watsky MA, Munger R, Hodge WG, Priest D, Griffith M. A simple，cross-linked collagen tissue substitute for corneal implantation．Invest Ophthalmol Vis Sci ,2006;47(5):1869-1875

3张超,金岩,刘建民,胡丹,聂鑫,刘源,雷娟.异种脱细胞角膜基质材料的生物相容性研究．国际眼科杂志，2005;5(2):250-252

4陈苹,傅瑶,范先群.猪角膜脱细胞基质的制备及生物相容性的实验研究.眼科研究,2006;24(4):367-370

5 Goldstein S, Harris SJ. Tissue-based heart valve grafts new developments．Cardiac Chronicle ,1994;8:1-8

6 Teixeira AI, Abrams GA, Bertics PJ, Murphy CJ, Nealey PE. Epithelial contact guidance on well-defined micro- and nanostructured substrates．J Cell Sci ,2003;116(10):1881-1892

7 Watsky MA. Keratocyte gap junctional communication in normal and wounded rabbit corneas and human corneas．Invest Ophthalmol Vis Sci ,1995;36(13):2568-2576

8 Mohan RR, Hutcheon AE, Choi R, Hong J, Lee J, Mohan RR, Ambrosio R Jr, Zieske JD, Wilson SE. Apoptosis, necrosis, proliferation, and myofibroblast generation in the stroma following LASIK and PRK．Exp Eye Res ,2003;76(1):71-87

9 Li F, Carlsson D, Lohmann C, Suuronen E, Vascotto S, Kobuch K, Sheardown H, Munger R, Nakamura M, Griffith M. Cellular and nerve regeneration within a biosynthetic extracellular matrix for corneal transplantation．PNAS ,2003;100(26):15346-15351

10 Liu Y, Griffith M, Watsky MA, Forrester JV, Kuffova L, Grant D, Merrett K, Carlsson DJ. Properties of porcine and recombinant human collagen matrices for optically clear tissue engineering applications．Biomacromolecules ,2006;7(6):1819-1828

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