【摘要】  目的：分析凋亡相关基因p 53和bcl- 2在眼眶腺样囊性癌组织中的表达，分析其关系及临床意义。 方法：免疫组化法检测51例眼眶腺样囊性癌临床标本和10例正常眼眶组织中P53和Bcl-2蛋白的表达状况。 结果：P53和Bcl-2在眼眶腺样囊性癌组织中的表达阳性率分别为53%和 65%，显著高于眼眶正常组织（53%,65%vs 10%，P＜0.01）。实性型腺样囊性癌中P53的表达率显著高于其在腺样-管状型中的表达率（86% vs 30%，P＜0.01）；P53和Bcl-2在复发组中的表达率显著高于其在初发组中的表达率（85% vs 42%，P＜0.01），（100% vs 53%，P＜0.01）；P53和Bcl-2二者在表达上具有相关性（χ 2＝1.461，P＞0.05）。结论：P53和Bcl-2蛋白的检测对于判断肿瘤对化疗的敏感性和预后有参考价值。

   【关键词】  眼眶腺样囊性癌 凋亡相关基因 耐药

     0引言

    腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma, ACC）是一种高度恶性的上皮性肿瘤，可发生于全身各部位，如涎腺、颌下腺、气管、肺、乳腺、皮肤等，于眼眶则好发于泪腺[1]。我们通过检测眼眶腺样囊性癌中凋亡相关基因的表达情况，了解并分析凋亡相关基因p 53和bcl- 2在眼眶腺样囊性癌组织中的表达与组织学分型和预后的关系及临床意义。我们采用的基因检测方法是蛋白质水平的免疫组织化学法，它是把血清学方法和显微示踪技术结合起来的一类技术，简便易行,容易掌握，具有较高的抗原抗体反应的特异性和灵敏性，可以对组织细胞的成分准确定位和定量分析。

    1材料和方法

    1.1材料  免疫组化染色试剂盒（HistostainTM-Plus Kits）（SP-9000），鼠抗人P53 mAb（DO-7）(ZM-0408)，鼠抗人Bcl-2 mAb（Bcl-2-100）(ZM-0010),浓缩型DAB试剂盒（ZLI-9032）,磷酸盐缓冲液（PBS）（配成0.01mol/L，1 000 mL，pH7.2～7.4）(ZLI-9061)。天津医科大学第二医院眼科病理室1992/2003年手术或活检后经病理组织学确诊的眼眶腺样囊性癌标本共51例，男22例，女29例，右眶20例，左眶31例。年龄19～62岁，初发38例，术后复发13例。按组织学分型：腺样-管状型30例，实性型21例。全部标本经40g/L甲醛固定，石蜡包埋，5μｍ连续切片，作病理组织学及免疫组化使用。对照组10例，取自相同时期眼眶内良性肿瘤手术中同时取出的眶内正常组织（脂肪、结缔组织、泪腺等），标本处理方法同实验组。

    1.2方法  采用过氧化物酶标记的链霉卵白素（streptavidin peroxidase, SP）染色试剂盒。以已知阳性的切片做阳性对照，以PBS代替一抗作空白对照。Bcl-2的阳性产物应定位于细胞膜和/或细胞质，P53的阳性产物应定位于细胞核，呈棕黄色细小颗粒状。以高倍镜下（×400）阳性细胞占肿瘤细胞的百分比为阳性判断标准：0级：无着色；1级：阳性细胞占肿瘤细胞数＜10％；2级：阳性细胞占肿瘤细胞数10％～50％；3级：阳性细胞占肿瘤细胞数＞50％。以0～1级为阴性（-），2～3级为阳性（+）（本判断标准由北京中杉金桥生物技术有限公司提供）。

     统计学处理：SPSS统计软件包（Ver10.0），方法采用χ 2检验，显著性水准为0.05。

    2结果

    2.1凋亡相关基因在眼眶腺样囊性癌中的表达  研究结果显示，P53和Bcl-2在眼眶腺样囊性癌中均有不同程度的表达。P53的阳性染色为棕黄色，位于细胞质和胞核，胞核呈均匀明显着色，且染色强度高于细胞质。Bcl-2的阳性染色均匀分布于细胞膜和胞质。眼眶腺样囊性癌标本中27例P53表达阳性，阳性率53%，正常组织标本中1例表达阳性，阳性率10%，P53在眼眶腺样囊性癌组织中的表达率显著高于眼眶正常组织(χ2＝7.128，P＜0.01）。腺样囊性癌标本中33例Bcl-2表达阳性，阳性率64.7%，正常组织标本中1例表达阳性，阳性率10%，Bcl-2在腺样囊性癌组织中的表达率显著高于眼眶正常组织(χ2＝11.034，P＜0.01）。

    2.2 P53和Bcl-2的表达与癌组织学分型的关系  P53在实性型腺样囊性癌中18例表达阳性，阳性率86%，在腺样—管状型中9例表达阳性，阳性率30%，P53在实性型中的阳性表达率较腺样－管状型明显增高，二率比较有显著性差异(χ2＝16.648，P＜0.01）。Bcl-2在实性型中15例表达阳性，阳性率71%，在腺样－管状型中18例表达阳性，阳性率60.0%，二率比较无显著性差异(χ 2＝0.715，P＞0.01)。

    2.3 P53和Bcl-2的表达与癌初发与复发的关系  P53在复发组病例中11例表达阳性，阳性率85%，在初发组病例中16例表达阳性，阳性率42%，在复发组中阳性率明显增高，二率比较有显著性差异(χ2=7.634，P <0.01)。Bcl-2在复发组病例中13例表达阳性，阳性率100%，在初发组病例中20例表达阳性，阳性率53%，在复发组中阳性率明显增高，二率比较有显著性差异(χ2=13.649，P <0.01)。

    2.4 P53和Bcl-2的表达之间的相互关系  对P53和Bcl-2在眼眶ACC中的表达情况进行比较，结果表明，24例二者共同表达阳性，占全部病例的47%，15例二者共同表达阴性，占全部病例的29%，P53与Bcl-2的表达之间具有相关性(χ2=1.461，P >0.05)。

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