禹海1 陈蕾2 姜晶2

沈阳军区总医院眼科 沈阳 110011

目的 观察腺相关病毒载体对糖尿病大鼠视网膜细胞的转染，并应用腺相关病毒载体介导色素上皮衍生因子基因玻璃体注射观察其对糖尿病大鼠视网膜血-视网膜屏障的影响。

方法 链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制成糖尿病大鼠模型，分为 4w, 12w和24w3组，右眼玻璃体注射2ul rAAV2-CMV-PEDF(1×1011 v.g/ml)为治疗组，左眼玻璃体注射2ul rAAV-CMV-GFP(1×1011 v.g/ml)为阴性对照组，另5只大鼠为正常对照组。依照按各时相点处死大鼠，其中取1只大鼠左眼球，行视网膜铺片及冰冻切片，荧光显微镜观察rAAV转染细胞表达量及其定位。其余通过Evans blue 法测定各组血-视网膜屏障通透性，比较各组结果。

结果 视网膜铺片：注射后4W，视网膜可见散在绿色荧光点，荧光强度较弱。12W时荧光点明显增多，范围加大，荧光强度明显增加，到24W时与与12W类似。冰冻切片：4W时，可见视网膜节细胞层散在荧光点，12W时节细胞全层布满荧光，强度明显增加。24W时与12W类似。正常对照组视网膜Evans blue含量（33.965±9.778）明显低于阴性对照4W、12W和24W组（分别为89.584± 25.975, 101.099±35.061, 116.443±28.753, P值均小于0.001）。4W治疗组含量（66.679±23.540）, 低于4W对照组，但统计学差异不显著。12W治疗组（47.060±15.631）及24W治疗组（55.953±22. 645）均显著低于相应对照组（P<0.001）。4W与12W治疗组间差异显著（P<0.05），余各治疗组间含量无明显差异。

结论 rAAV载体玻璃体注射可转染视网膜节细胞层，并持续表达24W以上。rAAV2- CMV-PEDF玻璃体注射可明显抑制糖尿病大鼠的血-视网膜屏障的损伤，提示PEDF对糖尿病大鼠血- 视网膜屏障功能有一定保护作用，通过rAAV载体转染视网膜细胞持续内源性分泌PEDF可能对于糖尿病黄斑水肿的治疗是一种可行途径。