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1.2.2脉络膜血管铺片检查
分别于光凝后7，14，21和28d各取1只大鼠，100g/L水合氯醛麻醉大鼠后，将大鼠仰卧位固定，于胸骨中线左侧2～3mm剖开胸腔，防止过多出血。迅速剪开肋骨，打开横隔膜，暴露心脏。小心将23号头皮针刺入左心室，剪开右心房排液，缓慢但持续经心脏注入含肝素钠生理盐水10mL，此后，改为0.1mol/L PBS (pH7.4)灌注，当多数血液已流出、流出液不见血色(约300mL/kg)后，改成用FITCD乳酸盐林格氏液20mL(内含FITCD 100mg，明胶2g)缓慢灌流固定大鼠。大鼠四肢及尾部出现肌肉颤动，表示灌流成功。灌流结束时，大鼠僵硬。摘除眼球后避光置于冰块冷冻10min，此后避光保存固定于40g/L的多聚甲醛中1h，显微镜下沿赤道部打开眼球，去除眼前节，小心揭除神经视网膜层，获得视网膜色素上皮层（RPE）一脉络膜一巩膜复合体标本，做4～6条放射状切开后将RPE面向上放置在载玻片上。乙醇脱水，二甲苯透明。利用激光共焦荧光显微镜对RPE脉络膜一巩膜复合体进行观察和测量。以488nm激光激发样品，收集530nm荧光信号。计算机采集数字图像（软件Laser Scanning Microscope Fluoview Version 4.3）。
1.2.3病理学检查
大鼠于FFA检查后2d过量麻醉处死，立即摘除眼球，置于40g/L多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定24h。经梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，平行于角膜至视盘的矢状位连续4μm切片切至激光斑处。常规HE染色。Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学检测按试剂盒说明书进行，采用SP法染色，AEC显色，经苏木素复染后封片。兔抗人Ⅷ因子多克隆抗体的工作浓度为1∶50。着色部位为胞质呈紫红色染色。
1.2.4 CNV判定
取造影晚期像（FFA>5min）观察CNV形成渗漏情况。计算机图像分析系统计算每个时间点CNV的荧光素渗漏积分面积。CNV厚度通过光镜200倍视野下取连续切片中CNV区域内色素上皮层至视网膜内最高点的最大距离，每个时间点取20张切片进行测量，取平均值。
统计学分析：ImagePro Plus 6.0图像分析系统对FFA荧光素渗漏、脉络膜铺片CNV面积和厚度进行测量。所得数据用均数±标准差 (±s)表示。采用 SPSS 13.0统计软件包对数据进行正态性检验、方差齐性检验后用单因素方差分析的方法，其均数的两两比较用SNK检验，P<0.05为有显著性意义。
2结果
2.1眼底彩照和FFA观察
氪激光光凝BN大鼠视网膜时，光凝斑中央可见气泡形成，光凝后即刻光凝斑部呈强浓白，外围灰圈，视网膜水肿 (图1A)。有时视网膜内层或视网膜下少量出血。正常BN大鼠FFA，视网膜血管充盈呈放射状，脉络膜血管充盈并融合成弥漫的背景荧光，无荧光素渗漏。光凝后 7d，光凝区FFA早期即出现荧光素渗漏，晚期渗漏呈圆盘状 (图1B)。光凝后 14d，光凝区可见荧光素渗漏增加。光凝后 21d，光凝区可见更多的荧光素渗漏，荧光强度也进一步加强达高峰(图1C)。光凝后28d，荧光素渗漏程度与21d相比略有减少。7d时CNV渗漏面积为38674.8，为最少；21d时为91457.19，达高峰。光凝后7d与14，21和28d相比差异有显著性意义(P<0.01)。21d时渗漏最多，但14d和28d之间比较差异无显著性 (P>0.05，表1)。表1 光凝后不同时间荧光素渗漏面积和CNV厚度（略）
2.2脉络膜血管铺片观察
激光共焦扫描显微镜下见光凝后7d在光凝斑边缘及光凝斑中心的深部脉络膜血管可见FITC显影（图2A），光凝后21d见光凝斑深部明显CNV来源于深部脉络膜血管，朝向视网膜神经层生长，CNV与周围的脉络膜比较呈网状高荧光斑（图2B）。但CNV的面积因背景荧光明显，故测算不准确。
2.3 HE染色结果
正常BN大鼠眼视网膜及脉络膜各层组织结构清晰、完整。实验眼光凝后7d光斑处RPE层和Bruch膜明显破坏，外核层破坏或缺损，内核层排列紊乱，视网膜水肿，增生细胞自脉络膜穿过破损的Bruch膜和RPE层向视网膜内层增生，形成早期的CNV，呈纺锤形，CNV厚度为39μm，其中可见中性粒细胞、巨噬细胞和迁移增生的RPE细胞（图3A）。光凝后14d CNV进一步增生，CNV厚度为53μm，中性粒细胞和巨噬细胞减少，成纤维细胞和胶原纤维增多，RPE细胞迁移增生包绕新生血管。此后，CNV进一步增生，至21d达到高峰，CNV厚度为55μm，但21d时CNV厚度与14和28d相比无明显变化（图3B，表1）。
2.4 CNV中Ⅷ因子相关抗原表达
Ⅷ因子标记用于显示血管内皮细胞的迁移增生和新生血管的形成。正常视网膜内核层微血管及神经纤维层大血管、脉络膜毛细血管内皮细胞可见Ⅷ因子抗原染色呈紫红色，其他部位无阳性表达。光凝后7d光凝区视网膜下间隙散在阳性染色细胞（图4A），光凝后14d光凝区视网膜下阳性染色细胞逐渐增多至21d时，已经可见阳性细胞围成管腔（图4B）。
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