【摘要】 目的：分析川芎嗪对缺血性视网膜疾病的治疗效果。 方法：将1μmol/L内皮素(endothelin,ET1），10μL注入兔眼后部玻璃体腔中，制成缺血性视网膜疾病的动物模型。治疗组（n=15）给予川芎嗪（20mg/kg,iv，1次/d）,对照组（n=15）给予等量的生理盐水。7d后分别检测两组闪光视网膜电图（FERG），闪光视觉诱发电位（FVEP），眼底荧光血管造影（FFA），视网膜环核苷酸（cAMP,cGMP）的含量。结果：玻璃体腔内注射ET1，2d后FERG a，b波振幅均下降（P<0.05）。FVEP P波幅值下降，峰值潜伏期时延长(P<0.01)。FFA显示：视网膜血管变细。视网膜cAMP ,cGMP浓度和cAMP/cGMP比值均下降。与对照组相比，川芎嗪则显著改善了上述病变。结论：川芎嗪对缺血性视网膜疾病有明显的治疗作用。
【关键词】 川芎嗪；缺血性视网膜疾病；内皮素1；治疗
Effect of ligustrazine on experimental ischemic retina diseases
Juan Bu, JianJun Yang,Jing Li, LeJin Wang,WanRong Jin
1 Peking University Eye Center, the Third Hospital, Beijing 100083, China;
2Department of Ophthalmology, the People Hospital of Lintao County, Lintao 750050, Gansu Province, China;
3Department of Ophthalmology, the Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, Gansu Province, China
Abstract AIM: To investigate the effect of ligustrazine on animals with ischemic retina diseases which were induced by injection of endothlin1 to vitreous.METHODS: ET1 (106 mol/L, 10uL) was injected into the posterior vitreous of rabbit eyes to establish the animal model of ischemic retina diseases. Treatment group (n=15) received ligustrazine (20mg/kg, iv, qd), normal saline was given to control group (n=15) equivalently. At 7 days postoperatively, the content of flash electroretinogram (FERG), flash visual evoked potentials (FVEP), fluorescence fundus angiography (FFA) and retinal cyclic nucleotide (cAMP ,cGMP) in two groups were detected respectively.RESULTS: Two days after injection of ET1 in the posterior vitreous, significantly decreased amplitude of P (VEP) and a, b (ERG) wave (P<0.05) and the prolongation of latency in VEP (P<0.01) were found. The fundus results confirmed by FFA that showed hypofluorescence at early stage and hyperfluorescence later in optic nerve head, contractile vascular and edematous retina in rabbits received ET1 compared with normal. The application of ligustrazine significantly reversed these changes compared with those treated with the drug vehicle only.CONCLUSION: Early application of ligustrazine can significantly ameliorate the signs of ischemic retina diseases. These effects suggest that ligustrazine is a potential therapeutic agent for using in the treatment of ischemic retina diseases.
KEYWORDS: ligustrazine; ischemic retina diseases; endothelin1; treatment
0引言
缺血性视网膜疾病是由各种原因引起的视网膜血液循环障碍，进而导致视功能损害的一大类疾病。缺血后的视网膜刺激新生血管生长因子等物质的产生，从而出现新生血管，引起眼底出血，导致牵引性视网膜脱离的发生，最终使视力完全丧失。临床上缺乏确实有效的治疗手段，随着传统中药的新应用，可能会为治疗该病开辟一条新的途径。川芎嗪是从伞科植物川芎中提取的活性生物碱，近年来不断对此药的新用途进行开发，发现川芎嗪具有活血化瘀、改善微循环障碍和血液流变学异常，降低全血和血浆粘度及血浆纤维蛋白原含量的功能[1]。我们通过对川芎嗪视神经视网膜保护作用的基础研究，为临床用药提供了新的实验依据。
1材料和方法
1.1材料
健康成年青紫蓝兔30只（60眼），雌雄不限，体质量2.5～3kg，由北京大学医学部实验动物中心提供。美国ROLAND视觉电生理仪，德国海德堡共焦激光眼底荧光血管造影机，日本TOPCON眼底照相机，西安FJ2008G自动γ免疫计算器，日本JEM1200EX/S型透射电子显微镜。内皮素(endothelin,ET1)由北京东亚免疫技术研究所提供，cAMP,cGMP放免药盒由上海中医药大学提供，川芎嗪药物来自常州制药厂有限公司。用复方托品酰胺充分散大兔眼瞳孔（瞳孔直径≥7mm）后，沿耳缘静脉缓慢注射10g/L戊巴比妥钠（30mg/kg）及结膜囊内滴10g/L地卡因行全麻和角膜表面麻醉。无菌条件下于平坦部向兔眼后部玻璃体腔注入10μL的1μmol/L ET1，注射完毕后进行抗炎抗感染处理。通过直接检眼镜观察到所制备的动物模型发生视网膜血管变细，视网膜水肿等缺血改变。
1.2方法
分为对照组和川芎嗪治疗组，各15兔（30眼）。治疗组给予川芎嗪注射液20mg/kg, 1次/d。对照组给予等量的生理盐水。连续静脉注射给药7d。自由饮水，同等饲料喂养。FERG检查：用美多丽P散瞳，瞳孔大约在7mm以上，暗适应30min，10g/L的卡因表面麻醉后，开睑器开睑，安放金箔角膜接触电极。氯化银的参考电极及地电极分别置于经降低电阻处理(<5Ω)的前额正中皮肤及同侧耳缘皮肤处，另一眼被眼罩完全遮闭，标准全视野Granzfeld球，白光刺激，刺激频率0.5Hz，通频带1～300Hz，刺激强度为0Db Standard flash,分析时间为250ms。观察最大视网膜反应。FVEP检查：作用电极置于人字缝顶点后6mm处，参考电极及地电极分别位于耳缘及前额正中皮肤（电阻<5Ω），刺激频率1Hz,通频带1～50Hz,记录时间250ms，叠加100次。眼底荧光血管造影：将100g/L荧光素钠1mL由兔耳缘静脉注入后，动态观察视网膜血管及血循环的变化，并用TOPCON眼底照相机拍摄眼底照片。视网膜cAMP ,cGMP含量测定：将动物处死后，摘出眼球，小心完整的分离出视网膜，用滤纸尽可能吸干水分,立即在万分之一的分析天平上称质量。加入50mmol/L的醋酸缓冲液（PH 4.75）1mL，经匀浆，离心后，用放免法测其cAMP ,cGMP浓度，再除以标本的视网膜湿重，单位为pmol/mg。
统计学分析：各实验数据以均数±标准差(±s)表示，组间差异的显著性以方差分析和q检验完成，以P<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1 FERG和FVEP的变化
与对照组相比，川芎嗪治疗组FERG的a，b波振幅明显升高（P<0.05，表1），经川芎嗪治疗后，与对照组相比FVEP P波幅值显著提高（P<0.01），但P波峰值潜伏期时却无明显变化（P>0.05）。表1 FERG和FVEP a，b波及P波变化（略）
2.2眼底荧光血管造影
对照组动物视乳头充盈迟缓，早期较大区域（1/2～3/4PD）呈低荧光，后期渗漏，呈强荧光。视网膜血管普遍变细，视网膜水肿，色淡。川芎嗪组动物视乳头充盈时间在正常范围，仅见散在点片状低荧光，后期出现渗漏，呈强荧光。视网膜血管管径属正常，视网膜充盈正常。
2.3 cAMP和cGMP含量变化
川芎嗪治疗组视网膜组织的cAMP ,cGMP含量及cAMP /cGMP比值明显高于对照组（表2）。表2 视网膜组织cAMP,cGMP含量(pmol/mg)及cAMP/cGMP比值的变化（略）
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