【摘要】目的：探讨结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）抗体对兔青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕化的抑制作用。
方法：家兔5只双眼制作青光眼滤过手术模型。随机选取家兔一眼作为抗体组，分别于手术完成当时和术后5d结膜下注射0.1mL浓度为50mg/L的CTGF抗体；另一眼作为对照组在相同时间点结膜下注射0.1mL磷酸盐缓冲液。术后1,3,5,7,10,14d分别观察滤过泡形态并测量其面积和眼压值。
结果：术后7,10和14d抗体组滤过泡面积均大于对照组（P＜0.05），眼压均小于对照组（P＜0.05）。
结论：结膜下注射CTGF抗体可维持兔眼滤过手术后较大的滤过泡面积和较低的眼压。
【关键词】 结缔组织生长因子抗体 小梁切除术 滤过泡面积 眼压
Measurements of the filtering bleb area and intraocular pressure following subconjunctival injection of CTGF antibody after glaucoma filtration surgery in a rabbit model
JianMing Wang, Na Hui, YaZhi Fan, Lei Xiong, NaiXue Sun
Foundation item: Natural Science Foundation of Shaanxi Province, China (No. 2001SM66)
Department of Ophthalmology, the Second Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University, Xian 710004, Shaanxi Province, China
Abstract
AIM: To study the role of connective tissue growth factor (CTGF) antibody in inhibiting bleb scarring after glaucoma filtration surgery (GFS) in a rabbit model.
METHODS: GFS was performed on both eyes in 5 rabbits. One eye of each rabbits was chosen randomly as antibody group and received subconjunctival injection of 0.1mL CTGF antibody (50mg/L) when GFS finished and on 3 days after GFS. The other eye of each rabbit as control group was received subconjunctival injection of 0.1mL phosphate buffered saline (PBS) at the same time as antibody group. On postoperative 1, 3, 5, 7, 10 and 14 days, the appearance of filtrating blebs was observed under slit lamp, their areas and the intraocular pressure (IOP) were measured with micrometer and applanation tonometer, respectively.
RESULTS: On postoperative 7, 10 and 14 days, areas of filtrating blebs in antibody group were all larger than that in control group (P＜0.05) and IOPs of antibody group were lower than that of control group(P＜0.05).
CONCLUSION: Subconjunctival injection of CTGF antibody can maintain larger bleb area and lower IOP after GFS in rabbit. This indicates that CTGF antibody is most likely to be a novel agent to prevent excessive scarring following GFS.
KEYWORDS: connective tissue growth factor antibody; trabeculectomy;areas of filtrating bleb;intraocular pressure
0引言
青光眼滤过手术是一种降低眼压的重要的手术方式，其目的在于建立一个永久性的通道将房水从前房引流至结膜下，形成滤过泡。滤过手术失败的主要原因是手术区成纤维细胞增殖导致结膜过度愈合和滤过泡瘢痕化[1]。研究表明，结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF），作为转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGFβ）的下游作用因子[2]具有促进成纤维细胞增殖、移动、粘附和分泌细胞外基质的功能，是导致滤过泡瘢痕化和瘢痕形成的最主要、最直接的因素[3，4]。目前国内外尚未见到单独应用CTGF抗体对青光眼滤过手术后滤过泡面积和眼压的影响的研究报道。我们通过小梁切除术建立兔青光眼滤过手术模型，观察结膜下注射CTGF抗体对术后滤过泡面积和眼压的影响，探讨CTGF抗体在青光眼术后抗瘢痕化的作用，为其临床应用提供实验依据。
1材料和方法
1.1材料 健康新西兰白兔5只，雌雄不限，体质量约2kg，由西安交通大学医学院动物实验中心提供。CTGF亲和纯化抗体（武汉博士德生物工程公司）规格200mg/L，稀释至50mg/L后分装在无菌EP管内待用。眼压测量采用Kowa压平眼压计HA2型（日本Kowa有限公司）。裂隙灯和眼底镜分别检查每只家兔双眼无异常。术前3d家兔双眼用氯霉素滴眼液滴眼，4次/d。用压平式眼压计测量双眼眼压各3次，取其平均值作为术前眼压值。行双眼小梁切除术，由同一术者完成。盐酸氯胺酮50mg/kg和异丙嗪10mg/kg混合麻醉药肌肉注射后固定于手术台，术眼滴用1g/L丙美卡因表面麻醉剂3次，5g/L碘伏常规消毒，铺无菌孔巾。置开睑器，暴露球结膜，在上直肌颞侧象限沿角膜缘做以弯窿部为基底的结膜瓣，分离结膜下组织。暴露巩膜表面，充分止血。在10∶00～11∶00方位做以角膜缘为基底的1/2巩膜厚度的矩形巩膜瓣，约3mm×3mm，分离至透明角膜缘内约0.5mm，穿刺入前房。扩大切口，切除深部巩膜组织（小梁部位）约1mm×2mm，剪除周边虹膜组织。复位巩膜瓣，10 0缝线在巩膜瓣两角各固定一针，整理结膜瓣，5 0缝线紧密缝合结膜瓣。
1.2方法 手术完毕时立即随机选取一眼作为对照组，结膜下注射PBS液0.1mL；另一眼作为抗体组，结膜下注射浓度为50mg/L的CTGF抗体0.1mL。注射部位为上直肌鼻侧缘。术后用氯霉素滴眼液滴术眼，4次/d，共1wk。术后5d，再次给对照组结膜下注射PBS液0.1mL，抗体组结膜下注射50mg/L的CTGF抗体0.1mL。每次测量眼压前用裂隙灯仔细观察滤过泡的形态，用游标卡尺测量滤过泡的长和宽，各测量3次，取其平均值作为测量值，并计算滤过泡面积。压平式眼压计分别测量家兔双眼术后1,3,5,7,10和14d的眼压。每次测量前校正眼压计，以1g/L丙美卡因表面麻醉剂3次角膜表面麻醉，角膜荧光素染色。测量3次并取平均值作为眼压测量值。
统计学处理：数据记录采用均值±标准差，SPSS 13.0统计软件对数据进行处理。对照组与抗体组比较采用配对t检验，对照组或抗体组术后不同时间点的比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1滤过泡面积变化 两组滤过泡面积均随术后时间延长而逐渐减小。与术后1d相比，对照组从术后3d起逐渐缩小（P＜0.05），抗体组从术后5d起逐渐缩小（P＜0.05），结果提示对照组发生滤过泡纤维化较抗体组早，CTGF抗体可以延缓滤过泡纤维化的发生。术后1,3和5d，两组滤过泡面积差异无显著性（P＞0.05）。术后7,10和14d，抗体组面积大于对照组，差异有显著性（P＜0.01，P＜0.05），结果说明，从术后7d起，抗体组滤过泡瘢痕化程度明显低于对照组，提示CTGF抗体可以减轻滤过泡瘢痕化程度，具有一定的抗滤过泡瘢痕化作用（表1）。
2.2眼压变化 青光眼滤过术后两组眼压均较术前下降，差异有显著性（P＜0.01）。术后两组眼压均随时间推移而上升，其中术后7,10和14d同术后1d相比较，差异有显著性（P＜0.01，P＜0.05）。结果说明，滤过术降低眼压效果肯定，但术后可能存在手术区结膜组织增殖。术前、术后1,3和5d，两组眼压测量值差异无显著性（P＞0.05）。术后7，10和14d，抗体组眼压均低于对照组，差异有显著性（P＜0.01），且随时间推移，差值逐渐增大。结果提示术中和术后5d结膜下注射CTGF抗体，可以减缓术后眼压回升、维持较低眼压，因而具有一定的抗滤过泡瘢痕化作用(表2)。
表1 小梁切除术后滤过泡面积（略）
aP<0.05 vs术后1d;cP<0.05, dP<0.01 vs 对照组
表2 小梁切除术前后眼压（略）
aP<0.05, bP<0.01 vs术后1d;dP<0.01 vs 对照组
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