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3讨论
大量研究已证实，TGFβ是滤过泡瘢痕化的重要细胞因子之一[5]。Cordeiro等[6]利用TGFβ反义寡核苷酸和TGFβ特异性抗体CAT152有效抑制TGFβ作用，降低兔眼和人眼滤过术后瘢痕形成[7,8]。CTGF是结缔组织中存在的被TGFβ选择性激活的细胞因子。已有研究证实，CTGF能模拟TGFβ的许多致瘢痕化生物行为，如成纤维细胞增殖、移行和产生细胞外基质功能。杨咏梅等[9]研究发现，在兔眼的角膜创伤愈合过程中，TGF可上调CTGF的表达，CTGF做为TGF的下游因子，主要调节胶原组织的合成，决定着结缔组织生成的量及随后的瘢痕形成。而黄琼等[10]通过对兔角膜成纤维细胞的研究发现，一旦角膜受损，活化增生的角膜成纤维细胞合成CTGF增多，通过旁分泌途径刺激自身角膜成纤维细胞不断增生。Leask等[11]已在CTGF的启动子中发现TGFβ反应元件，TGFβ与TGFβ反应元件结合后才能启动CTGF基因转录，上调CTGF表达，提示CTGF是TGFβ的下游反应元件。Esson等[12]将CTGF注射至使用MMC的滤过泡中，可使滤过泡面积缩小50％，持续时间由13d缩短至6d，提示CTGF可促进滤过泡瘢痕化。Garrett等[13]用CTGF反义寡核苷酸抑制TGFβ引起的肌成纤维细胞分化和胶原基质收缩作用。这些研究说明 TGFβ通过CTGF发挥致瘢痕化效应，阻断CTGF有可能抑制滤过泡瘢痕化。Sherwood等[14]制作了植入引流管的青光眼滤过手术模型，应用CTGF抗体，结果发现滤过泡生存时间约26d，而结膜下注射平衡盐组滤过泡生存时间约17d，提示应用CTGF抗体可延长滤过泡生存时间，具有抗滤过泡瘢痕化作用。但该研究并未观察术后眼压的变化，也未观察术后滤过泡面积的变化。我们发现，结膜下注射CTGF抗体的兔眼滤过泡面积大于注射PBS的兔眼滤过泡面积，而前者的眼压小于后者，说明结膜下注射CTGF抗体能抑制滤过泡瘢痕化，与Sherwood的研究结果一致。因此，CTGF抗体可能会成为一种新的抗滤过泡瘢痕化药物，有必要进行深入研究[4]。
Esson等[12]用ELISA和免疫组化研究发现，小梁切除术后滤过泡组织的TGFβ和CTGF表达水平明显高于正常组织，TGFβ在术后5～7d时水平最高，免疫荧光显影最明显。CTGF在术后1d时下降，术后3d时明显增多，术后5d时表达水平达最高，术后7d时表达下降。二者均在术后21d表达水平回到基线。小梁切除术后CTGF的表达呈现明显的单峰值特点，在术后3d和5d阻断CTGF，理论上可产生一定的抗滤过泡瘢痕化效应。我们在手术完成当时予以结膜下注射CTGF抗体，术后1d对照组滤过泡面积和眼压大于抗体组，两组间差别无显著性。术后3d和5d抗体组滤过泡面积大于对照组，眼压则前者小于后者，两组间差别无显著性，提示手术完成当时注射的CTGF抗体未发挥明显的抗瘢痕化作用。而目前的文献中均未检测滤过术完成时滤过泡组织中CTGF表达水平，若滤过术完成时CTGF表达水平低，则CTGF抗体抗瘢痕化效应自然弱。因此，不能由术后1,3和5d两组间差别无显著性推断手术完成时结膜下注射CTGF抗体无抗瘢痕化效应。术后5d，在测量滤过泡面积和眼压之后，再次予以结膜下注射CTGF抗体，术后7d抗体组滤过泡面积大于对照组，眼压小于对照组，且两组间差别都具有显著性，说明术后5d注射的CTGF抗体发挥抗滤过泡瘢痕化作用。尽管术后5d之后再未注射CTGF抗体，但术后10d和14d，抗体组滤过泡面积均大于对照组，眼压均小于对照组，且两组间差别都具有显著性，提示在术后5d表达水平高峰时阻断CTGF可引起长效的抗瘢痕化效应。我们选取浓度为50mg/L的CTGF抗体0.1mL,注射于上直肌鼻侧缘结膜下。若条件许可，研究不同浓度梯度和剂量梯度的CTGF抗体结膜下注射，可发现CTGF抗体发挥抑制滤过泡瘢痕化效应的最适浓度和剂量，对其临床应用具有重要意义。熊新春等[15]证实3∶00结膜下注射的5氟尿嘧啶，术后1,3和10d时在12∶00结膜滤过泡区域可检测到氟，提示非12∶00结膜下注射药物，药物可扩散至滤过泡区域。本实验在上直肌鼻侧缘结膜下注射CTGF抗体，能在上直肌颞侧滤光泡区域产生抗滤过泡瘢痕化效应，说明结膜下注射是应用CTGF抗体抗滤过泡瘢痕化的有效的给药方式。总之，术后5d在CTGF表达高峰时结膜下注射CTGF抗体可产生显著的抗滤过泡瘢痕化作用，提高小梁切除术手术成功率。为使CTGF抗体发挥最佳的抗瘢痕化效果，其使用的时间点、浓度、剂量和注射部位等问题仍需进一步的研究。
【参考文献】
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8 Zhang JY, Leng F, Peng SM. Effect of antiglaucoma topical medications on expression of TGFβ and MMP of human Tenons fibroblast. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi) 2007;7(5):12941297
9杨咏梅,吴欣怡,杜立群.结缔组织生长因子与转化生长因子及Smad信号通路在兔角膜创伤愈合中的作用.中华眼科杂志 2006;42(10):918924
10黄琼,胡燕华,李琦涵,等.兔角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达.中华眼科杂志 2004;40(6):414415
11 Leask A, Holmes A, Black CM, et al. Connective tissue growth factor gene regulation. Requirements for its induction by transforming growth factorbeta 2 in fibroblasts. J Biol Chem2003;278(15):1300813015
12 Esson DW, Neelakantan A, Iyer SA, et al. Expression of connective tissue growth factor after glaucoma filtration surgery in a rabbit model. Invest Ophthalmol Vis Sci2004;45(2):485491
13 Garrett Q, Khaw PT, Blalock TD, et al. Involvement of CTGF in TGFbeta1stimulation of myofibroblast differentiation and collagen matrix contraction in the presence of mechanical stress. Invest Ophthalmol Vis
Sci2004;45(4):11091116
14 Sherwood MB. A sequential, multipletreatment, targeted approach to reduce wound healing and failure of glaucoma filtration surgery in a rabbit model (an American Ophthalmological Society thesis). Trans Am Ophthalmol Soc 2006;104:478492
15熊新春,李敬,祁士华. 5FU结膜下注射后在眼组织中的分布.眼科研究2003;21(4):377388 上一页 [1] [2] |
