角膜结膜及泪器病             916                                      PO0232

　　胚胎干细胞微环境对角膜上皮细胞生物学特性的影响

　　胥莹 刘敬波 宋革 马宁 熊翠菊 王智崇*

　　广州中山眼科中心  510060

　　目的：探索应用胚胎干细胞微环境使已分化成熟的角膜上皮细胞获得更强、更长增殖能力的可能性。

　　方法：取材并培养P1－P6代的人角膜上皮细胞，设定实验组为添加30％ES细胞培养上清液培养的细胞，对照组为常规培养液培养的细胞。倒置相差显微镜观察比较两组角膜上皮细胞形态，MTT法测定生长曲线，流式细胞仪测定细胞生长周期。

　　结果：实验组与对照组的角膜上皮细胞自P1代至P6代形态学并无明显差异。MTT法测定细胞生长曲线：P2代实验组细胞第3天进入对数生长期，对照组第4天进入对数生长期；P4代实验组细胞对数生长期为第3－6天，对照组为第4－6天；P5代实验组细胞对数生长期为第2－4天，对照组第2－6天；P6代实验组细胞对数生长期为第2－5天，对照组为第2－7天。流式细胞仪测定细胞周期：P2代实验组细胞处于S期的比例是40.7％，对照为28.6％；P3代实验组为43.4％，对照组为53.9％；P5代实验组为43.4％，对照组为49％；P6代实验组为27.4％，对照组为32.2％。

　　结论：胚胎干细胞培养上清对体外培养角膜上皮细胞的影响，需要作用至少一代的时间才能检测到变化。表现为使角膜上皮细胞的对数生长期增长，角膜上皮细胞进入S期的细胞比例增多。胚胎干细胞微环境对于人角膜上皮细胞去分化的影响是一个有益的探索，能够观察到角膜上皮细胞更强的增值能力。

　　本课题受以下基金资助:国家“十五”科技攻关计划(批准号: 2004BA720A15)、教育部博士点基金(20030558074)和广东省科技计划项目(2005B30901002)资助

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