角膜结膜及泪器病             917                                      PO0233

　　表皮干细胞的横向分化重建角膜上皮的体内外研究

　　高楠  黄冰 王智崇*  葛坚  卢蓉  陈系古 卢丽  彭展

　　广州中山眼科中心 510060

　　目的　探讨利用自体表皮干细胞重建角膜上皮的可能性。

　　方法　1.体外部分：观察猴表皮干细胞在体外微环境诱导下，横向分化为角膜上皮细胞的情况，将分离培养的2～4代猴表皮干细胞与角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养,分别于共培养前、后使用流式细胞仪、RT-PCR和免疫组织化学技术检测和鉴定分化情况；2.体内部分：观察联合体内微环境诱导，重建角膜上皮的效果，人羊膜为载体，将体外诱导的猴表皮干细胞移植到去上皮的自体角膜表面。
　
　　结果　表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志，k15和整合素β1阳性，K1/K10和K3/K12阴性；共培养后k15和整合素β1阳性，K1/K10阴性，并表达K3/K12。自体眼表移植后8周，角膜透明、角膜荧光素染色阴性、无新生血管，上皮和基底膜结合紧密，与正常角膜有相似组织学结构，无结膜细胞侵入，AE5免疫组织化学染色阳性。

　　结论　在适宜微环境下，表皮干细胞具有横向分化为角膜上皮细胞的潜能，利用自体表皮干细胞修复和重建角膜上皮层可行，预期将成为构建组织工程化类自体生物角膜的种子细胞。

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