【摘要】 目的：观察雌激素受体两种亚型ERα和ERβ在大鼠晶状体的分布特点，探讨雌激素受体在晶状体生理活动中的作用及雌激素对晶状体保护作用的可能机制。
方法：选取健康成年大鼠10只(20眼), 雌雄各5只, 制作由甲醛固定石蜡包埋的眼球切片。应用免疫组织化学SP法，用种属特异性抗体(兔抗大鼠ERα和羊抗大鼠ERβ抗体), 分别观察雌激素受体ERα和ERβ在雌、雄大鼠晶状体组织的表达情况。
结果：ERα和ERβ免疫阳性反应物存在于大鼠赤道部晶状体上皮细胞和部分较新形成的晶状体纤维的细胞核及少量胞质中, 而中央部和周边部晶状体上皮细胞、晶状体囊膜及老化晶状体纤维内未见有阳性反应物。相同部位两种受体阳性细胞率无显著性差异（P>0.05），雌、雄大鼠间两种受体表达无显著性差异（P>0.05）。
结论：两性大鼠赤道部晶状体上皮细胞和部分较新形成的晶状体纤维中存在雌激素受体ERα和ERβ，提示雌激素参与两性晶状体生理活动的调节，直接的受体介导可能是雌激素发挥晶状体保护作用的途径之一。
【关键词】 晶状体 雌激素受体 免疫组织化学 大鼠
0引言
雌激素属甾体类激素，对男女生殖系统均有重要作用，可调节生殖系统及其组织的生长、代谢及生理功能。此外，雌激素对机体各种生理状态的维持发挥着不可替代的作用，对脑、心血管系统、骨胳等组织都有着重要的调节作用。流行病学、临床和实验研究结果初步表明，雌激素可防止晶状体的混浊，抑制白内障的发生，对晶状体有保护作用［1-3］，但其保护作用是一个单纯的化学过程或/和一个基因调节的过程；在发挥作用途径上是雌激素受体（estrogen receptor, ER）介导的经典途径或/和非经典途径尚无定论。雌激素如何通过受体途径发挥其保护作用，阻止白内障发生尚未完全阐明［4-6］。雌激素受体ER属核受体超家族的一员，有ERα，ERβ两种亚型，两者在结构和功能上极其相似，但又具有明显的功能差异，两者各司其职又相互起交叉信号作用［7］。应用不同的方法可在不同水平上测定两者的表达情况。ERα，ERβ广泛分布于两性生殖器官、心、脑、骨、肾等。国外有初步研究［8,9］证实包括晶状体在内的眼部多种组织中有ERα和ERβ的存在，但未见有关两种亚型受体在晶状体表达的系统报道。本研究采用简便易行的免疫组织化学方法对大鼠晶状体中两种类型雌激素受体的表达及分布特点以及性别差异作了初步研究，为进一步揭示雌激素晶状体保护作用机制提供理论依据。
1材料和方法
1.1材料 随机选取10只健康成年SD大鼠，体质量200～250g，雌雄各半，由第三军医大学大坪医院野战外科研究所动物中心提供。断颈处死大鼠，迅速手术取出双侧眼球固定于16g/L甲醛溶液中固定48h，常规石蜡包埋，5μm厚组织切片（载玻片用防脱片剂100g/L Polylysine处理）。切片烘烤（60℃，12h）后室温保存，2wk内检测。一抗兔抗大鼠ERα多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司，1∶500），羊抗大鼠ERβ（美国NeoMarkers公司，1∶200）；抗原修复液（博士德生物工程有限公司），即用型羊抗兔SP试剂盒(北京中山生物技术有限公司), DAB试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。
1.2方法 每例标本取切片６ 张，分为２组，每组３张。染色步骤：实验组之石蜡切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗3min共3次；30mL/L H2O2孵育10min，以消除内源性过氧化物酶。蒸馏水洗3min共3次；高温高压修复：枸橼酸盐缓冲液浸浴下，95～100℃持续7～8min，自然冷却至室温后，PBS洗涤3min共3次，滴加抗原修复液保留10min，PBS洗涤3min共3次；滴加正常山羊血清封闭液： 37℃孵育15min，甩干后不洗，滴加一抗工作液4℃过夜；PBS洗涤3min共3次；加生物素标记二抗： 37℃孵育15min； PBS洗涤3min共3次；滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液：37℃孵育15min；PBS洗涤3min共3次；DAB显色试剂盒室温显色：取蒸馏水1mL，加A，B，C试剂各1滴，镜下控制反应时间（5～10min）；苏木素轻度复染（1～2min），盐酸酒精分色，自来水冲洗，烘干，透明，封片；显微镜下观察并照相。阴性对照以PBS代替一抗孵育切片，其余操作同上。阳性对照为已知阳性片。结果判定：ERα和ERβ阳性着色细胞为胞核和少量胞质呈棕黄色，随机选取5个高倍视野，每视野计数50个细胞，计阳性细胞数，计算其百分率。
统计学处理：所有数据均采用SPSS 12.0统计软件进行分析，用Bonferroni法进行组间阳性百分率比较，以α=0.05为显著性水准。
2结果
2.1 ER表达部位 ERα和ERβ免疫反应阳性物质主要存在于大鼠赤道部晶状体上皮细胞(LECs) 和部分较新形成的晶状体纤维的细胞核及少量胞质中，而晶状体囊膜及老化晶状体纤维内未见阳性着色。阴性对照片未见有阳性着色。
2.2 ER两种亚型的表达情况 着色强度上ERα表达细胞较ERβ更强，数量上ERα阳性细胞数较ERβ多，但相同部位两种受体蛋白表达量没有统计学差异（P>0.05，表1）。
表1 两种雌激素受体在大鼠赤道部晶状体上皮细胞中的表达（略）
2.3两性间ER两种亚型的表达情况 雌性和雄性大鼠晶状体均有ERα和ERβ表达，两性间两种受体表达部位相似，表达强度无显著性差异（P>0.05，表2）。
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