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2结果
2.1不同代数HRPE细胞Fas的表达
HRPE与淋巴细胞体外共培养时，HRPE细胞Fas表达随着传代迅速下降，Fas表达与传代代数呈负相关（阳性细胞率r＝0.859，P＜0。01，平均荧光强度r＝0.880，P＜0.01），至第3代与第4代间Fas表达差异无统计学意义（P>0.05，图13）。
2.2不同代数HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡的差异
HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡随着传代迅速减弱，淋巴细胞凋亡率与传代代数呈负相关（r= 0.838，P< 0.01），至第3代与第4代间凋亡率表达差异无统计学意义（P>0。05，图45）。
3讨论
细胞增殖和分化是细胞生命进化中所获得的基本属性,细胞分化机制极其复杂，是细胞与细胞、细胞与体液和细胞与细胞外基质相互作用下，由众多基因参与、经过多阶段和多环节完成的动态演变过程。人体细胞与细胞及胞外基质之间通过神经内分泌系统保持着高度的相互依存，通过相关基因的调控使之发生增殖或分化。 尽管当前人工模拟体内环境的技术已经很高，细胞生活在人工培养条件下可以相当好地生存、生长和增殖，但当细胞离体培养后失去上述体内联系，特定的分化基因表达减弱或停止，而进化中保守的细胞增殖活动却可维持，遂使体内外细胞出现差异[5，6]。实际上这种差异从细胞离体培养的瞬间就开始了[7]。
免疫调控能力是选择不同代次HRPE细胞是否可适合作为视网膜色素上皮移植的种子细胞的一个重要因素。本实验在体外培养条件下，建立HRPE细胞和异体淋巴细胞的共培养系统，观察不同代数HRPE细胞对淋巴细胞的影响。实验中采用流式细胞仪检测到HRPE细胞表达FasL，并能诱导T细胞凋亡。这提示，眼后节的HRPE细胞具有通过诱导入侵淋巴细胞发生凋亡的主动免疫调控机制[810]。HRPE细胞诱导活化淋巴细胞凋亡对于眼后节免疫赦免状态的维持可能起着一定的作用。然而本实验同时发现原代HRPE细胞诱导异体淋巴细胞凋亡率较高，2代以后HRPE诱导异体淋巴细胞凋亡率明显降低。这可能与细胞脱离体内正常的生理环境后,本身表面抗原改变从而导致了RPE细胞表达FasL随着传代数增加而持续降低有关[11]。
选用不同代数HRPE细胞作为视网膜色素上皮移植的种子细胞应当兼顾其增殖和分化潜能。本实验从形态学和免疫赦免能力方面考虑，视网膜色素上皮移植应选用3代以内的HRPE细胞。而最终选用最佳代次的HRPE细胞，还需对不同代次HRPE细胞的其他功能如吞噬能力、转运能力等进行进一步的研究。
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10徐国兴,谢茂松,傅冷西,等.溶血磷脂酸对人类视网膜色素上皮细胞生物学功能的影响研究.国际眼科杂志2007;7(5):12811284
11谢茂松,徐国兴,李琼,等.人类视网膜色素上皮细胞体外培养的转分化.国际眼科杂志2008;8(7):13281330 上一页 [1] [2] |
