作者：白洁，罗丹，刘平
作者单位：（150001）中国黑龙江省哈尔滨市，哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院三病房
【摘要】目的:通过暂时阻断妊娠期Wistar大鼠子宫动脉血供的方法建立因子宫缺血引起胎鼠产生先天性白内障的动物模型。方法:于孕鼠妊娠第19d暂时钳夹双侧子宫动脉，血流阻断时间分别为5，10，20min，并于分娩后即取胎鼠晶状体行扫描电镜检查。结果:妊娠晚期阻断孕鼠子宫动脉10min可建立鼠先天性白内障模型。结论:通过阻断子宫血流可成功建立先天性白内障模型。
【关键词】 动物模型；先天性白内障；子宫缺血；Wistar大鼠
Establishment of a rat model of congenital cataract by interruption of the uteri artery blood flow
Jie Bai, Dan Luo, Ping Liu
Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China
Correspondence to: Ping Liu. Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China. [email protected]
AbstractAIM: To establish an experimental animal model of fetal rat congenital cataract by temporary interruption of the uteri artery blood flow at late stage of pregnancy.
METHODS: The pregnancy rats undergone an operation with uteri artery blood flow interrupted temporarily at the 19th day of pregnancy, the effect of different time spots of artery blood interruption (5, 10, 20 minutes) were compared and analyzed . The lens of the postnatal rats was observed by scanning electron microscope.
RESULTS: The rat congenital cataract model was successfully established by interrupting the uteri artery in pregnant rats for 10 minutes.
CONCLUSION: Through temporarily clamping the uteri artery in pregnant rats, a congenital cataract model can be successfully established in rats.
KEYWORDS: experimental animal model; congenital cataract; uteri ischemia; rat
0引言
临床上将出生后即存在或出生后才逐渐形成的晶状体部分或全部混浊称为先天性白内障。它是造成儿童失明和弱视的主要原因，先天性白内障是由于胚胎期晶状体代谢异常而导致自身透明度下降的疾病[1]。该病的发生率约为0.01%～0.06%，占儿童致盲性眼病的第二位[2]。诸多因素可导致胎儿先天性白内障的发生，宫内缺氧亦为主要因素之一[3]。我们通过以Wistar大鼠为实验动物，成功建立了大鼠先天性白内障模型，从而为临床研究提供帮助。
1材料和方法
1.1材料
成年发情期雌性Wistar大鼠24只，均为处女鼠，体质量200～220g，雄性Wistar大鼠16只，体重260～280g，均由哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心提供。随机抽取雄性大鼠4只，雌性大鼠6只，以雌雄比为3∶2同笼饲养在普通级饲养室，平均室温23℃，噪音控制在60dB以下，为大鼠提供足量、清洁的食物及饮用水，实验室用具及器械定期消毒。第2d 8∶00观察母鼠，将阴道内发现阴栓或显微镜下发现精子者标记为怀孕0d,以后顺延，记录受孕日期。受孕后雌鼠随机分为对照组（A）和3个实验组，即阻断子宫血流5min(B),10min(C),20min(D)组。孕鼠分笼饲养，饲养条件同前。
1.2方法
每次随机取6只实验组大鼠，腹部涂以20g/L碘伏，再以750mL/L乙醇常规消毒，取100g/L水合氯醛0.5mL腹腔注射，约3～5min后实验大鼠即达麻醉状态。孕鼠取仰卧位并固定四肢，沿腹正中线切开皮肤，切口长约2.5～3cm。分离皮下组织及肌肉，切开腹膜，轻轻拨开肠管，探查并暴露双侧子宫动脉。对照组于开腹探查后暴露双侧子宫动脉10min，用37℃的生理盐水浸泡过的消毒纱布盖住创口，随后以0号线逐层缝合腹壁;实验组A,B,C分别用止血钳钳夹双侧子宫动脉5，10，20min后恢复血流，依次缝合腹膜，皮下组织及皮肤，待母鼠清醒后分笼饲养。子鼠出生后由母鼠或代母鼠喂养。将各组存活小鼠于出生后25d处死，取出晶状体，于室温下立即放入20g/L戊二醛中固定，每天更换新鲜的固定液。3d后取出标本，磷酸缓冲液冲洗3次，10min/次，于显微镜下沿赤道部切取横截面为1mm2柱状晶状体结构作为透射电镜标本。
统计学处理：采用SPSS 13.0软件进行χ2检验。
2结果
将出生后3d仍存活的幼鼠记入存活例数中，随子宫动脉阻断时间的延长，胎鼠死亡率增高，其中阻断时间为20min者，胎鼠大多数于生后24h内死亡（P＜0.05）。阻断子宫血流5min组及10min组与正常分娩组出生的乳鼠，在相应时间点的死亡率差别无显著性差异（P＞0.05）。A，B，C，D即对照组与阻断子宫动脉5,10,20min组，其出生后乳鼠死亡率分别为7%，11%，19%和39%。子宫动脉血流阻断2.5min后即见胎动增加，6min后胎动减少，9min胎盘淤血，若超过15min则可出现胎盘出血，甚至与子宫剥离而造成死胎或母鼠死亡。各实验组晶状体纤维排列所见（50~80nm，透射电镜）如图1AF。
3讨论
人类先天性白内障的病因之一是胎儿宫内缺氧[1]。患儿的出生史与其关系密切，尤其是新生儿窒息、新生儿缺氧性脑病[4]。胎鼠在母体内仅靠两侧子宫动脉摄取氧及营养物质。本实验通过直接阻断母鼠子宫动脉血流使胎鼠失去血氧供应而造成其宫内缺氧状态。大鼠对缺氧的敏感性高，适合做缺氧动物模型。因其繁殖力强，生殖周期短，为在短时间内复制多只相同的动物模型提供了便利条件。本方法可随意控制血液阻断时间，术中可直观地观察胎鼠缺氧后的变化情况，分娩后子鼠可进行母乳喂养，子鼠分笼后母鼠还可重复使用。妊娠中晚期的大鼠不易发生流产,因此我们选择在妊娠第19d实施手术，为研究阻断子宫血供的最佳时间,我们分别对孕鼠子宫动脉结扎阻断5，10，20min,通过对手术中情况，死胎率及晶状体透射电镜观察进行对照,结果表明阻断子宫动脉10min可以成功建立胎鼠先天性白内障模型。与阻断血流20min相比,其手术时间短,所需麻醉药量相对较少,术后苏醒时间短,相对减少了麻醉药对孕鼠及其胎仔的影响。另外，本实验方法操作简单，费用低，可行性高，胎鼠宫内缺氧时间易于掌握，重复性好，为制备先天性白内障动物模型及探讨人类先天性白内障的发生、发展提供了新的实验方法。
【参考文献】
1葛坚，赵家良，崔浩.眼科学（七年制）.北京：人民卫生出版社2005:219220
2布娟，赵堪兴.先天性白内障分子发病机制的研究进展.国际眼科杂志2005;5(5):973977
3 Holmes JM, Leske DA, Burke JP, et al. Birth prevalence of visually significant infantile cataract in a defined U.S. population. Ophthalmic Epidemiol2003;10(2):6769
4李卫红，张新媛，云波.先天性白内障病因的多因素分析.眼科2004;13(5):288290 |
