作者：卜倩,李全智
作者单位：(830000)中国新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市，新疆医科大学附属中医医院眼科
【摘要】目的：研究退翳片对单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis，HSK)小鼠血清IL2水平的影响并探讨药效机制。
方法：建立小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型,给予高、中、低三种剂量的退翳片灌服,并以ACV组、模型组和空白组作为对照。利用ELISA法检测各组小鼠血清IL2分泌水平。
结果：退翳片高、中、低剂量组小鼠血清IL2水平较模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)；ACV组与模型组比较无统计学差异(P>0.05)；退翳片高、中剂量组与ACV组相比差异有统计学意义(P<0.01)。
结论：退翳片可提高小鼠血清IL2分泌水平，调节免疫功能抑制HSK发展。
【关键词】 退翳片；单纯疱疹病毒性角膜炎；白介素2
Experimental study of Interleunkin2 of Tuiyi tablets on herpes simplex keratitis model in mice
Qian Bu, QuanZhi Li
Department of Ophthalmology, Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Sinkiang Medical University, Urumqi 830000, Sinkiang Uygur Autonomous Region, China
Correspondence to: QuanZhi Li. Department of Ophthalmology, Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Sinkiang Medical University, Urumqi 830000, Sinkiang Uygur Autonomous Region, China. [email protected]
AbstractAIM: To study the effect of Tuiyi tablets on the level of serum IL2 of herpes simplex keratitis (HSK) model in mice, and to identify the mechanism of pharmacodynamic action.
METHODS: The model of HSK mice was constructed. Different dose of Tuiyi tablets were taken oral respectively. Acyclovir (ACV), model and blank group were used as control groups. Concentration of IL2 in mouse serum was measured by ELISA method.
RESULTS: The level of IL2 was statistical in Tuiyi tablets of different dose group comparing with the model group (P<0.01). There was no significant difference between ACV and model group (P>0.05). The statistical analysis showed significant differences among Tuiyi tablethigh, medium dose groups and ACV group (P<0.01).
CONCLUSION: Tuiyi tablets can improve the level of IL2 in serum, regulate immune function and inhibit the development of HSK.
KEYWORDS: Tuiyi tablets; herpes simplex keratitis; IL2
0引言
单纯疱疹病毒Ⅰ型( herpes simplex virus I ，HSVI) 感染眼部所引起的单纯疱疹病毒性角膜炎 (herpes simplex keratitis，HSK)以其高复发率、高致盲率严重损害患者视力，是目前国内外公认的最常见的致盲眼病之一[1]。它具有难治愈、易复发、病程久等特点,临床颇为棘手,特别是近年来由于药物的毒性，耐药、激素应用不恰当等，HSK反复发作且增多，严重影响视功能。因此进行抗病毒研究减少本病复发已成为眼科界关注的焦点[2]。
1材料和方法
1.1材料
鼠龄为4～6wk,体质量18～22g的健康清洁级雌性Balb/c小鼠70只（由新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心动物繁殖中心提供）。动物观察室温度22.0±2.0℃，自然光照，喂饲以新疆维吾尔自治区疾控中心动物室购买的灭菌颗粒饲料，饮用消毒处理的自来水。动物自由摄食饮水。各组小鼠在实验期间按组分笼饲养。退翳片为新疆医科大学附属中医医院委托新疆奇康制药有限公司生产的产品，规格：0.4g/粒（1.656g生药/粒，相当于3.31g生药/g，由荆芥、防风、黄芩、蝉衣、一枝蒿、川芎、木贼草组成），用蒸馏水配制成混悬液，以人鼠单位体质量用药量直接换算后的剂量的5倍为低剂量，10倍为中剂量，20倍为高剂量。无环鸟苷（ACV）片（南京瑞尔医药有限公司生产），0.1g/片，用蒸馏水配制成混悬液，予退翳片中剂量等容混悬液灌胃。HSV1(F标准毒株) , 1×1010 PFU/L, 细菌真菌培养阴性，新疆维吾尔自治区疾控中心提供。小鼠白介素2定量酶联检测试剂盒由上海森雄科技实业有限公司生产。
1.2方法
参照小鼠角膜上皮划痕法[3]，小鼠购进后予3d适应环境，同时予每只小鼠双眼点2.5g/L氯霉素眼药水，2次/d。第4d将实验鼠水合氯醛0.06mL ip麻醉后,置于显微镜下，用25号无菌手术刀片交叉划伤右眼角膜上皮层，将5μL含有1×107 PFU病毒的无菌最小基础培养基 (minimum essential medium，MEM)点于右眼角膜表面并轻轻按摩鼠眼睑30s。造模前后分别予小鼠角膜荧光素钠染色并用裂隙灯显微镜检查角膜改变，评判造模结果。小鼠角膜感染病毒后18h荧光素钠染色，裂隙灯显微镜下检查角膜改变。发现原发角膜感染表现为急性上皮型角膜炎，小鼠角膜出现点状、片状上皮缺损，荧光素钠染色阳性，HSK小鼠造模成功。将行HSK造模的小鼠60只按随机数字表分为5组,每组12只，未行造模的小鼠10只做为空白对照组。造模后2d开始给药，每天灌胃1次，连续给药3wk。剂量如下：空白对照组每天予退翳片中剂量等容的蒸馏水灌胃;模型对照组每天予退翳片中剂量等容的蒸馏水灌胃;无环鸟苷组每天予0.18g/kg的无环鸟苷混悬液灌胃，相当于10倍成人剂量;退翳片低剂量组每天予2.07g/kg体重的退翳片混悬液灌胃，相当于5倍成人剂量;退翳片中剂量组每天予4.14 g/kg的退翳片混悬液灌胃，相当于10倍成人剂量；退翳片高剂量组每天予8。28g/kg的退翳片混悬液灌胃，相当于20倍成人剂量。小鼠染毒后，角膜荧光素钠染色阴性3只，麻醉死亡1只，共计有56只进入灌胃阶段。灌胃期间，高剂量组、低剂量组、ACV组各死亡1只，模型组死亡3只，共计小鼠死亡6只。故实验结束时动物数为60只。小鼠接种病毒后21d摘除眼球后干净试管收集血液，离心收集血清，采用双抗夹心ELISA检测方法对HSK小鼠血清中IL2含量进行检测。
统计学处理：所有实验数据录入计算机中，采用SPSS 12.0统计软件进行统计分析。计量资料的描述用 ±s表示，两组及多组间的比较用方差分析。
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