|
2结果
2.1糖尿病视神经断面的形态学变化 糖尿病病程1mo的大鼠从横断面上观察到神经纤维组织疏松，排列紊乱; 神经髓鞘大量脱失，染色深浅不均;间质增多;部分轴突水肿;治疗组观察可见水肿减轻，轴突纤维排列相对整齐，数量增加（图1）。
2.2视神经纤维的变化 神经纤维密度正常值为（10.2±1.8）×103个/μm2，糖尿病组纤维密度明显下降为(3.9±0.7)×103个/μm2，使用神经营养因子治疗后为(5.2±0.9)×103个/μm2，3组之间两两比较均有非常显著差异（P<0.01）。神经纤维数量3组之间也有显著差异P<0.01，3组神经纤维光密度值之间没有差异（表1）。
3讨论
视神经纤维准确计数是观察视神经损伤、修复和再生的一个量化程度很高的方法[1]。Sanchez等[2]首次通过视神经横断面神经髓鞘甲苯胺蓝染色，清楚地计数了猴和人视神经的纤维数量。本实验将大鼠视神经用电镜方法固定、包埋、作成1μm的半薄切片进行记数，克服了传统石蜡切片和冰冻切片太厚，不能准确数清大鼠纤维个数的缺点，同时使用神经纤维密度为统计量比单纯的统计神经纤维个数更有说服力。实验所得正常大鼠视神经纤维数量约为106 ～107个的结果与Bailes等[3]人报道的实验结果基本吻合。
视神经是由神经节细胞的轴突汇聚而成，我们实验发现糖尿病组神经纤维数量比正常大鼠明显减少，呈现不同程度的髓鞘脱失及结构改变、神经胶质细胞受损、神经纤维缺失等，支持糖尿病对视神经和胶质细胞的损伤，推测视神经可能直接受到高血糖波动的影响，或是糖尿病对视网膜神经节细胞的损伤导致轴突纤维数量减少，视神经纤维退行性变，因此视神经病变可以间接反映DR的严重程度。关于糖尿病对视神经纤维数量影响的动物实验国内外尚未见报道，临床上糖尿病视神经病变开始受到大家关注,糖尿病1～5a患者, 视神经病变发病率约为5% , 6～10a达8%，临床资料显示随DR严重程度其发病率有增加趋势，但两者的相关性还在进一步研究[4]，本实验为临床糖尿病视神经病变提供了宝贵的实验依据。
BDNF主要在视网膜光感受器细胞层、内核层、神经节细胞和神经纤维层中表达，大部分由视网膜自身分泌,对神经节细胞的存活起重要作用，无长突细胞可能是其主要来源[5]。Cui 等[6]研究发现视神经损伤后, BDNF 基因表达上调，内源性BDNF 升高保护视网膜神经节细胞，Seki等[7]在DR 研究中发现,外源性给予BDNF 可防止无长突神经细胞退变,促进其存活，这些研究提示糖尿病早期视网膜分泌神经营养因子减少，外源性BDNF直接起到保护视网膜神经节细胞,促进其损伤修复的作用。视神经纤维计数发现治疗组轴突水肿减轻，髓鞘退行性变有所改善，纤维数量明显恢复，可见BDNF玻璃体腔注射对于糖尿病视神经损伤有明显效果，能减缓糖尿病神经退行性改变的发展，研究表明[8]BDNF的有效剂量为0.5μg,半衰期为1wk，而且药效具有叠加效应，故本实验使用2μg，注射1次/wk，收到很好效果，但是长期应用BDNF 可以激活NOS(一氧化氮合成酶) 活性,降低其神经元保护作用。
BDNF 作为神经营养因子不仅能促进培养的视网膜神经节细胞存活，同时亦可加强双极细胞生存率约300%,而这种作用可能是BDNF 通过与Müller 细胞P75NTR 结合,产生和释放碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）后直接作用于双极细胞[9]；bFGF又是光感受器存活因子,能减少光感受器变性,玻璃体内注入BDNF 还可保护糖尿病引起的光感受器细胞损伤[10]。眼内注射神经营养因子BDNF还能减少多巴胺能无长突细胞的凋亡数量,使TH（无长突胶质细胞的免疫活性标记）上调[11]。BDNF 虽然在眼内含量很少,但其对视觉器官发育,视神经损伤后保持视网膜神经节细胞存活,视神经轴索再生和保护光感受器细胞免受光损伤有重要作用，从而提示BDNF在DR的多重治疗作用。随着研究进一步深入,BDNF 在临床应用必将越来越广泛。
【参考文献】
1 Li S, Hu B, Tay D, et al. Intravitreal transplants of Schwann cells and fibroblasts promote the survival of axotomized retinal ganglion cells in rats. Brain Res 2004；1029 (1) :5664
2 Yang L, Li MY. The human eyes neural histology study: Counting of optic nerve fiber and measuring of optic disk diameter and area. Zhong hua Yandibing Zazhi（Chin J Ocular Fundus Dis）1999；15（1）:1622
3 Bailes HJ, Trezise AE, Collin SP. The number morpholog and distribution of retinal anglion cells and optic axons in the Australian lungfish Neoceratodus forsteri (Krefft 1870). Vis Neurosci 2006；23(2): 257273
4丁小燕，欧杰雄，马红婕，等.糖尿病性视神经病变的临床分析.中国实用眼科杂志2005；23（12）：12691274
5 Isenmann S, Kretz A, Cellerno A. Molecular determinants of retinal ganglion cell development survival and regeneration. Prog Retin Eye Res 2003；22(4):483543
6 Cui IL, Kang J, Wang L, et al. Effect of neurotrophic factors on the expression of retinal growth associated protein43 mRNA in retina after eptie nerve injuries. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi) 2005；5(5): 902906
7 Seki M, Tanaka T, Nawa H. Involvement of brainderived neurotrophic factor in early retinal neuropathy of streptozotocin induced diabetes in rats: therapeutic potential of brainderived neurotrophic factor for dopaminergic amacrine cells. Diabetes 2004；53 (9):2412 2419
8 Watanabe M, Tokita B, Katoa M, et al. Intravitreal Injiections Of Neurotrophic Factors And Forskolin Enhance Survival And Axonal Regeneration of Axotomized Ganglion cells in cat retina. Neuroscience 2003；116：733742
9 Karen C, Alejandra B, Rafael L, et al. Cell death in the inner nuclear layer of the retina is modulated by BDNF. Developmental Brain Research 2002；139:3253309
10 Ikeda K, Tanihara H, Tatsuno T. Brainderived neurotrophic factor shows a protective effect and improves recovery of the ERG bwave response in lightdamage. Neurochem 2003；87:290296
11 Gastinger MJ, Singh RS, Barber AJ. Loss of cholinergic and dopaminergic amacrine cells in streptozotocindiabetic rat and Ins2Akitadiabetic mouse retinas. Invest Ophthalmol Vis Sci 2006；47(7): 31433150 上一页 [1] [2] |
