摘 要 目的：研究异种表面角膜镜片术后机体对异种角膜的免疫反应，阐明人体对异种角膜的免疫耐受机制。
方法：应用流式细胞仪对9例（9只眼）接受异种表面角膜镜片术患者术后外周血T细胞的分布和自然杀伤细胞的活性进行了分析。
结果：术后2个月，T细胞未被激活，NK活化程度显著提高（P＜0.01），但未激发排斥反应。
结论：猴角膜镜片虽可诱发轻微的免疫应答，但未达到增强抗原诱发的T细胞增殖应答的程度。可能与猴和人的种属相近，角膜镜片的抗原性低，抗原不易或缓慢被吞噬细胞摄取而成为致耐原，进而诱导免疫耐受有关。术后局部应用免疫抑制剂可防止移植排斥反应的发生。
分类号 R779.65
Analysis of the peripheral T lymphocyte subsets and natural killer cell activity after xenogenic epikeratophakia with flow cytometry／YaoXiaoming…∥Ophthalmol CHN.-1998，8（4）．-48～51（Department of Ophthalmology，Shenzhen Peoples Hospital，Shenzhen 518020）
To study the mechanism of the immune tolerance of the xenogenic epikeratophakia，4 patients with keratoconus and 5 patients with aphakia were treated by epikeratophakia monkey lenticules.The peripheral lymphocyte subsets andthe natural killer cell activity were analysed with flow cytometry before and 1 month，2 months after surgery respectively.T cell was not activatedand the rejection was not set off though the activation of NK was significant 2 months postoperatively.The immune response activated by monkey lenticules wasslight and not enough to promote the proliferation of the lenticule-inducedT cell.It was possible that the low antigenicity of monkey lenticules couldprogressively cause the immune tolerance，and topical steroid may be helpful to inhibit the xenogenic rejection.
Subject terms Epikeratophakia；Transplantation，heterologous；T-Lymphocytes；Killer cells，natural；Immune tolerance；Flow cytometry
同种表面角膜镜片术已被证明是一种安全、可靠、排斥率低的屈光手术。但异种表面角膜镜片术（xenogenic epikeratophakia，XE）的临床应用尚无报道。作者对4例圆锥角膜和5例无晶体眼患者施行了猴→人XE术，并对术后外周血T淋巴细胞的分布和自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）的活性进行了检测。
1 材料和方法
1.1 检测对象 已施行XE的患者9例。其中，男性5例，女性4例，平均年龄25.07岁。手术前后均未全身应用影响免疫功能的药物。
1.2 制剂与仪器 抗体均为异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）和藻红蛋白（phycoerythrin，PE）标记的单克隆抗体（购自美国Becton Dickinson Immunocytometry Systems，SanJose）。包括：羊抗鼠IgG*PE，IgG*FITC，鼠抗人HLA-DR、CD69＋、CD71＋、CD25＋，鼠抗人CD3*FITC、CD8*FITC，鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD54。流式细胞仪（FACStarplus）为美国B.D.公司产。
1.3 实验方法 术前、术后1、2个月分别采取
静脉血，加肝素抗凝。采取双色直接免疫荧光标记法。取肝素抗凝静脉血50μl抗体混合，室温孵育30min，然后用红细胞裂解溶液（0.155 M NH4CL，0.01M KHCO3，0.1mM EDTA，pH7.4）裂解红细胞，离心获取有核细胞，用PBS洗一次。用1％多聚甲醛：PBS固定10min后用流式细胞仪和软件LYSYSⅡ进行双色荧光参数获取及统计学分析。
2 结果
2.1 术后T细胞亚群分析
术后，除CD16显著增加外，CD3、CD4、CD8和CD19均无明显变化（P＞0.01），见表1，图1。
2.2 手术前后T细胞活化相关抗原表达
同时表达CD69＋CD3＋、HLA-DR＋CD3＋、CD71＋CD3＋和CD25＋CD3＋的细胞分别为CD3＋阳性细胞的4.25±3.1％、40.28±8.44％、3.66±2.19％和13.41±5.96％，术后分别为1.73±1.3％、55.21±12.13％、15.19±10.14％和8.82±5.45％，统计学上无显著性差异（P＞0.01），见表2。
2.3 手术前后Tc活化相关抗原表达
术前，同时表达CD69＋CD8＋和CD25＋CD8＋的细胞分别为CD8＋阳性细胞的6.13±4.73％、10.0±4.02％、和9.44±6.18％，术后分别为2.33±1.46％、13.04±5.57％和4.21±2.09％。统计学上无显著性差异（P＞0.01），见表3。
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