术后T细胞和Tc活化相关抗原表达的直方图见图2。

　　表1　XE术前、后淋巴细胞亚群分析（n＝9）

　　表2　XE术后T细胞活化相关抗原的表达（n＝9）

　　表3　XE术后细胞毒T细胞活化

　　图1　EKP术后淋巴细胞亚群分布的FCM分析

　　图2　异种EKP术后外周血淋巴

　　细胞亚群FCM分析直方图

　　3　讨论

　　一般认为，移植排斥反应是细胞介导的免疫反应［1］。早在本世纪初就有人提出排斥是淋巴样细胞介导的反应。50年代证实了参与排斥的细胞主要为T细胞，并发现细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic　T　cell，Tc）在排斥反应中的重要意义［2］。已知T细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞（NK）等均参与了排斥反应，但尚未见异种表面角膜镜片术对外周血免疫细胞影响的报告。

　　CD19是B细胞分化抗原CD25即白细胞介素2受体（interleukin-2receptor，IL-2R）；CD69又名激活诱导分子（activation　inducer　molecule，AIM），参与淋巴细胞的早期激活，CD71又名转铁蛋白受体（transferrin　receptor，TfR），在增殖细胞过程中起重要作用。因此，CD25、CD69和CD71的表达，均是T细胞活化的标志。IL-2是一种由T细胞分泌的在机体免疫应答中起关键作用的细胞因子，能促进T淋巴增殖。T细胞通过其表面的抗原受体复合物CD3／Ti与抗原／MHC复合物作用后被激活，分泌IL-2并表达IL-2R，IL-2又作用于IL-2R，使抗原特异性T细胞克隆增殖，最终完成细胞免疫应答［3］。CD69可表达于早期激活淋巴细胞免疫、胸腺细胞和血小板细胞表面［4］。CD71作为转铁蛋白受体，参与了细胞增殖必需元素铁的代谢。已证实，在淋巴细胞受刺激后20～24小时，便可观察到TfR的表达。HLA-DR也是活化淋巴细胞表达的分子。由于静止的T淋巴细胞不表达HLA-DR，所以，其表达常被作为T细胞活化的标志。结果表明，XE术后2个月T淋巴细胞B细胞均未被激活，也未发生免疫排斥反应，这与临床观察结果相一致。

　　在移植排斥反应中，最终导致移植破坏的原因是体内产生了Tc细胞和具有细胞毒作用的抗体。一般认为Tc细胞是参与移植物排斥反应的主要效应细胞。但参与移植排斥整个效应过程的细胞不可由某一类细胞单独完成，NK、巨嗜细胞等均对排斥反应起到某种调节作用。NK通过表面的某种蛋白激酶C和蛋白酪氨酸激酶的作用，破坏靶细胞。本研究结果显示，XE术后自然杀伤细胞（natural　killers，NK）活化程度显著提高（P＜0.01）。人NK表面标志有HNK-1，CD16（Leu-11）和NKH-1（Leu-19）等三种。根据其在细胞上的表达情况可将NK分为三组，其中，以CD3　CD16＋Leu9＋占多数，并表现最强的NK活性。因此，CD16＋抗原的表达被认为是NK活化的标志。本研究结果发现NK虽显著活化，但并未激发排斥反应，其机制不明。推测这种活化尚未达到足以分泌IL-2来增强抗原诱发的T细胞增殖应答的程度。

　　移植物中含有受者体内所缺如的移植抗原是导致移植免疫排斥反应的根本原因。异种组织中含有的这种移植抗原显然要比同种组织中所含的多，抗原性也强得多。因此，如何降低异种组织的抗原性是提高异种移植成功率的重要因素之一。不少作者认为，冷冻后的角膜由于去除了角膜上皮，抗原性降低［5］，但有的作者认为冷冻处理后并不能降低角膜的抗原性。Bourne［6］分别用新鲜、冷冻保存和浸于冷冻保存液中的角膜为兔施行了板层角膜移植。术后所有植片至少维持透明12天，但新鲜植片、冷冻保存植片和冷冻液保存植片发生混浊的时间分别为术后27、24和25天，三组的混浊植片数、体征和混浊时间均无显著差异，认为，冷冻并不能降低异种角膜的抗原性。本文显示猴表面角膜镜片植入人类角膜后并未激发免疫排斥反应，这可能与猴角膜镜片的抗原性极低，或异种镜片抗原不易或缓慢被吞噬细胞摄取因而成为致耐原，诱导出免疫耐受有关。

　　4　参考文献

　　Hall BM．Cells mediating allograft rejection．Transplantation，1991，51：1141．

　　 Nabholz M，Maconald HR.Cytolytic T lymphocytes.Am Immunol，1983，273.

　　 Shaw J.Mechanisms regulating the level of IL-2 mRNA in T lymphocytes.J Immunol，1988，140：2243．

　　 Borrego F，Pena J，Solan R.Regulation of expression on human natural killer cells：differential CD69 involvement of protein kinase C and protein tyrosine kinases.Eur J Immunol，1993，23：1039．

　　 Schultz RO，Gallun AB.The effects of cryopreservation on the corneal heterograft reaction.In：Capella JA，Edelhauser EF，van Horn DL（eds）.Corneal Preservation.Springfield，Ⅲ，Charles C Thomas，1973：300，

　　 Bourne WM.Antigenicity of cryopreserved corneas．Arch Ophthalmol，1975，93：215．

　　（1998-05-11收稿）

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