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2 结 果
2.1 透镜诱导豚鼠近视屈光度数和眼轴长度结果 实验前3组动物双眼的屈光度数和眼轴长度相匹配，差异无统计学意义（P＞0.05）。 实验后各组动物双眼的屈光度数和眼轴长度见表1。实验后3组双眼远视屈光度数明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），3组眼轴均延长，差异有统计学意义（P＜0.05）。Ⅰ组 、Ⅱ组分别诱导出近视,且眼轴分别延长了（0.45±0.11）mm和（0.39±0.19）mm,两组差异有统计学意义（P＜0.01）; Ⅰ组、Ⅱ组诱导眼和对照眼实验前后屈光度和眼轴长度差值的比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 透镜诱导豚鼠近视眼巩膜细胞凋亡的检测结果 对照组应用TUNEL法染色未检测到凋亡细胞，Ⅰ组和Ⅱ组分别配戴-20D和-10D透镜14?d后，豚鼠诱导眼后极部巩膜中出现TUNEL染色阳性的凋亡细胞核，呈棕黄色或棕褐色，凋亡率显著高于Ⅲ组，差异有统计学意义（P＜0.05）；见表2。透射电镜检测到Ⅰ、Ⅱ组的巩膜成纤维细胞凋亡数量增多，主要表现为：细胞分布不均匀，细胞形态不一, 细胞内空泡形成，线粒体肿胀，扩张的内质网与细胞膜融合,部分细胞皱缩，细胞核固缩，染色质固缩周边化，形成新月形,马蹄形,镰刀状及柳叶形等改变，并可见典型凋亡小体。Ⅲ组未见典型凋亡细胞。
2.3 透镜诱导豚鼠近视眼巩膜组织中bFGF和bcl2蛋白的表达 3组后极部巩膜组织免疫组织化学实验均能检测到bFGF、bcl2蛋白（见图1，图2），Ⅲ组bFGF、bcl2蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ、Ⅱ组（P＜0.05），Ⅱ组明显低于Ⅲ组（P＜0.05），随诱导近视程度的增高，bFGF、bcl2蛋白的表达率出现明显下降，差异具有统计学意义。Westernblot法检查结果：经ECL系统分析，3组bFGF蛋白与内对照βactin比值的平均值分别为：0.61±0.02、1.1±0.06、1.63±0.13，3组bcl2蛋白与内对照βactin比值的平均值分别为：0.71±0.03、1.26±0.05、1.51±0.17，其结果与免疫组织化学实验结果一致。图1 光镜下豚鼠巩膜组织成纤维细胞bFGF（A）及bcl2（B）染色阳性（×400）
3 讨 论
实验性近视最突出的表现是实验眼的眼轴延长，所以对巩膜组织中成纤维细胞的组织学、生化和分子生物学研究显得非常重要［3］。豚鼠巩膜的结构与人类巩膜相似，豚鼠近视眼伴有后极部巩膜变薄，与其它哺乳动物的实验性近视眼的改变相似，并且豚鼠形觉剥夺性近视眼巩膜代谢的研究发现，巩膜的硫化糖胺多糖和羟脯氨酸含量明显降低，表明巩膜蛋白多糖和胶原等细胞外基质含量减少，巩膜变薄，易于扩张，眼轴延长，形成轴性近视，这些变化接近人类近视眼巩膜的改变［4］。
本研究通过对豚鼠进行负透镜的单眼诱导，成功地建立了豚鼠实验性近视模型，表明了豚鼠对透镜诱导的离焦是敏感的。由于透镜的配戴，使视网膜成像发生改变，干扰了豚鼠对视网膜的感知，从而产生了离焦信号，此信号通过多种途径经过信号的传递过程最终作用于巩膜，下调巩膜胶原和糖蛋白的合成，使巩膜细胞外基质含量发生变化，从而引起眼轴的变化［5］。
以往的研究表明，在透镜诱导豚鼠实验性近视眼的巩膜组织中存在细胞凋亡［2］。在实验性近视眼巩膜发生的一系列病理改变中，我们认为其发生机制是包括细胞凋亡在内的多种因素所造成的，而这些多种因素之间又有着相互的联系。对实验性近视眼发病机制的研究应该是对这些相互关系的观察和探索。
bFGF作为一种强有力的促细胞增殖、分化和存活的营养/生长因子,与肿瘤、胚胎发育、变性、以及血管异常性病变等疾病间的关系,已得到生物医学界的广泛研究和多学科的重视。以往的研究着重于bFGF对细胞增殖的促进作用，有助于损伤、炎症组织的恢复及免疫调节［6］。bFGF除了促细胞增殖外,还可抑制细胞凋亡［79］。1984年Tsujimoto等［10］从B细胞淋巴瘤染色体易位t（14；18）（q32；q21）断裂点处发现bcl2（B cell lymphoma /leukemia 2）的。它最初是从人的滤泡性B淋巴细胞中分离出来的，定位于人第18号染色体。迄今的研究表明，bcl2通过抵抗多种形式的细胞凋亡而延长细胞的寿命［11］。Seko等［12］研究证实近视眼巩膜中bFGF的含量减少。Rohrer等［13］研究报道结膜下注射和玻璃体腔注射bFGF均能阻止鸡形觉剥夺性近视的眼球的过度生长。还有研究显示，bFGF阻止形觉剥夺性近视的发生具有剂量依赖性［14］。
在实验性近视眼巩膜组织中以往的研究已证实存在bFGF 的下降，那么在巩膜组织中是否存在bcl2 的下调。本研究采用免疫组织化学实验和蛋白印迹法实验结果发现：在透镜诱导豚鼠近视的后极部巩膜组织中存在着bFGF和bcl2蛋白，且随着近视程度的增高，二者的含量出现进行性下降。诱导眼bFGF的阳性率低于对照组的阳性率，说明豚鼠透镜诱导近视眼巩膜中bFGF的含量减少，活性降低，因而其阻止近视发展的作用减弱，使眼轴延长。透镜诱导豚鼠近视眼巩膜组织中bFGF的变化趋势与形觉剥夺性近视眼的变化一致，说明透镜诱导近视眼的形成和形觉剥夺性近视眼的发生，在巩膜生长因子的变化上是相同的，表明两种类型的近视眼形成中，生长因子的调节存在相似的机制。另外，透镜诱导豚鼠近视的后极部巩膜组织中bcl2出现表达，其阳性率低于对照组，提示在透镜诱导豚鼠实验性近视眼的后极部巩膜组织中bFGF与bcl2 二者的下降与实验性近视眼巩膜组织变薄的病理改变有着重要关联。
透镜诱导豚鼠实验性近视眼后极部巩膜细胞中bFGF和bcl2基因的下降是导致细胞凋亡率的增加的一个重要原因，而透镜诱导豚鼠近视眼巩膜细胞凋亡率的增加是引起近视眼巩膜组织变薄等一系列病理改变的原因之一。对实验性近视眼细胞凋亡的更深入研究，尤其是细胞凋亡中信号传递机制的研究，将是攻克近视发病机制和防治近视的一个重要课题。
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