作者：高髻云, 张伟 作者单位：山东大学 1. 医学院， 济南 250012； 2. 附属千佛山医院眼科， 济南 250014
【摘要】 目的 研究羊膜匀浆提取液在兔实验性小梁切除术后对滤过泡及TGFβ1、CTGF表达的影响。方法 将30只新西兰大白兔随机平均分为实验组和对照组,选右眼行标准小梁切除术。实验组于术后当天开始每天用羊膜匀浆液点眼，对照组单纯用氯霉素滴眼液点眼。在不同时间点分别作临床及病理观察。结果 共22眼形成功能性滤过泡，其中实验组14眼，对照组8眼(P＜0.05)。眼压除术前与术后2d差异无统计学意义(P＞0.05)外，其余观察点差异均有统计学意义(P＜0.05)。实验组成纤维细胞(Fb)数目较对照组少(P＜0.05)。免疫组化染色观察TGFβ1、CTGF的表达，实验组低于对照组（P＜0.05）。结论 羊膜匀浆上清液点眼无并发症发生，且能增强滤过泡滤过功能及降眼压效果，对滤过泡TGFβ1、CTGF表达有抑制作用。
【关键词】 羊膜匀浆上清液；转化生长因子β1；结缔组织生长因子；青光眼；小梁切除术
GAO Jiyun, ZHANG Wei
1. School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, China;
2. Department of Ophthalmology, Qianfoshan Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250014, China
To investigate the effects of human amniotic homogenate on blebs and the expressions of TGFβ1 and CTGF following trabeculectomy in rabbits. Methods Thirty New Zealand white rabbits were randomly divided into two groups: the control group and the experimental group. The right eyes were subjected to standard trabeculectomies. After the operations, human amniotic homogenate was topically used in the experimental group four times daily for 14 days and was not used in the control group. The clinical features and the pathological changes were observed on different days after surgeries. Results 14 eyes in the experimental group had functional blebs and 8 in the control group(P＜0.05). The intraocular pressure of the control group was higher than that of the experimental group after 2 days（P＜0.05). The fibroblasts in the experimental group were less than those in the control group(P＜0.05). The expressions of TGFβ1 and CTGF were lower in the experimental group than those in the control group(P＜0.05). Conclusions The supernatant of a homogenized amnion has no side effects, and it can inhibit the expressions of TGFβ1 and CTGF and improves the filtering function and decreases the intraocular pressure.
Key words: Human amniotic homogenate； TGFβ1； CTGF； Glaucoma； Trabeculectomy
青光眼小梁切除术失败的主要原因是成纤维细胞（fibroblast，Fb）增生，致使滤过泡瘢痕化。影响成纤维细胞增殖的主要活性因子有转化生长因子β1，还有其下游作用元件结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)［1］。临床上采用众多的调节技术抑制纤维增生、提高手术成功率，但未见术后应用羊膜匀浆上清液局部点眼对术后滤过泡及TGFβ1、CTGF表达影响的报道。本研究将羊膜匀浆上清液运用于兔实验性小梁切除术后，探讨其抗纤维组织增殖的作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康新西兰大白兔30只，雌雄不限，体重2～4?kg。随机平均分为实验组和对照组，均选右眼为手术眼。
1.2 羊膜匀浆上清液的制备
从常规健康足月剖宫产孕妇胎盘获取羊膜，PBS清洗，称取羊膜的湿重，按1∶1加入PBS，匀浆后，按1∶5加PBS离心，取上清液备用(2?h内用)。
采用Folin酚法测定羊膜匀浆上清液中蛋白含量，其蛋白含量约800?mg/L。
1.3 试剂
羊抗兔TGFβ1多克隆抗体、羊抗兔CTGF多克隆抗体（博士德公司），免疫组化试剂盒（中杉公司）。
1.4 手术方法
行标准的小梁切除术，用生理盐水洗眼后，肌内注射地西泮(2.5?mg/kg)和氯氨酮(4～5?mg/kg)全麻，做以穹隆为基底的结膜瓣，以角膜缘为基底的4?mm×4?mm l/3厚的巩膜瓣，切除1?mm×2?mm小梁组织，做虹膜周切孔，分别缝合巩膜瓣及球结膜。实验组手术后即用羊膜匀浆上清液和氯霉素滴眼液点眼，每天4次，对照组单用氯霉素滴眼液点眼，每天4次。
1.5 临床观察
于术后2、5、10、14?d在裂隙灯下观察滤过泡、角膜、前房变化情况,并用Schiotz眼压计测量眼压，记录3次测量的平均值。
1.6 病理检查
于术后5、10、14?d各取5只兔经耳缘静脉注射空气处死，取手术眼术区10?mm×10?mm范围球壁组织及球结膜，于10％甲醛液中固定24?h，切片后作HE染色，观察术区瘢痕形成情况及滤过泡形态。免疫组化染色观察滤过泡TGFβ1、CTGF的表达，并测定其免疫组化密度值。
1.7 统计学处理
应用SPSS10.0软件，所有数据以±ｓ表示，采用t检验分析。
2 结 果
2.1 临床观察指标
2.1.1 并发症情况
术区结膜早期轻度充血，无明显炎症反应，两组在做虹膜周切时各有1眼少量前房出血，术后第3天吸收，角膜内皮功能良好，眼底检查正常。未发现角膜水肿、浅前房、滤过泡渗漏、眼内炎、视网膜脱离等并发症。
2.1.2 眼压变化
术前及术后2、5、10、14?d眼压测量结果见表1。统计学分析表明实验组降眼压效果明显好于对照组。 表1 手术前后眼压比较(略）
2.1.3 滤过泡形态
于上述相应时间观察滤过泡形态。滤过泡按Kronfeld法分型：功能性滤过泡，共22眼，其中实验组14眼，对照组8眼；非功能性滤过泡，共8眼，其中实验组1眼，对照组7眼，差异有统计学意义（P＜0.05)。提示实验组功能性滤过泡明显多于对照组。对照组术后2?d，滤过泡平复、弥散，有微状空隙，5?d部分滤过泡弥散，10?d滤过泡局限包裹，隆起处有瘢痕粘连，14?d手术部位大部分被瘢痕覆盖。实验组术后14?d滤过道仍通畅,滤过泡明显。结果表明，小梁切除术后，羊膜上清液点眼无并发症发生，滤过泡功能、降眼压效果明显好于对照组。
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