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2.2 病理结果
2.2.1 HE染色观察
术后5?d，对照组结膜下纤维组织增生，滤过道狭窄，Fb较多，排列紊乱，实验组结膜下组织疏松，可见纤维束空隙，Fb较少，细胞呈梭形，排列整齐，滤过道通畅。术后10?d,两组炎性细胞均较第5?d减少，实验组滤过道通畅，对照组部分滤过道通畅。术后14?d对照组滤过道大量增厚,致密的胶原结缔组织增生，排列紊乱，可见血管长入，滤过道大部分封闭,实验组纤维增生不明显，滤过道保持开放。光镜下计算术后14?d滤过道处平均每高倍镜视野Fb数量。实验组为51.57±1.37，对照组为67.64±1.90，两组差异有统计学意义(P＜0.05)。
2.2.2 免疫组化结果
对照组与实验组滤过道成纤维细胞中均有TGFβ1、CTGF表达，且均在术后5?d时表达量最高。阳性表达部位呈棕黄色，以胞浆为主（如图1、2箭头所示）。对照组5?d结膜滤过泡免疫组化染色为深黄色，CTGF呈强阳性表达（图1），实验组5?d结膜滤过泡免疫组化染色稀疏、密度低，CTGF呈弱阳性表达（图2）。对照组14?d CTGF表达较术后5?d弱，实验组14?d CTGF呈弱阳性表达。TGFβ1表达规律同CTGF。
免疫组化密度值测定采用计算机图像自动分析系统，物镜放大倍数为20×10，每例切片随机测定5个视野，测出TGFβ1、CTGF的阳性染色密度，取5个视野均值作为结果，见表2。统计分析结果表明，小梁切除术后羊膜匀浆点眼对术后TGFβ1、CTGF表达具有抑制作用。表2 CTGF、TGFβ1免疫组化密度值比较（略）
3 讨 论
小梁切除术仍是青光眼手术治疗的主要方法，导致手术失败的主要原因是纤维组织增殖、滤过道瘢痕化。目前临床上应用抗代谢药物（如5FU、MMC）及羊膜移植［2］技术抑制术后滤过道瘢痕形成。本实验采用小梁切除术后新鲜羊膜匀浆上清液点眼，探讨对滤过泡、眼压及TGFβ1、CTGF表达的影响。结果显示,羊膜匀浆上清液点眼无并发症发生，且增强滤过泡滤过功能及降眼压效果。免疫组化病理检查表明，术后应用新鲜羊膜匀浆上清液点眼，能够抑制成纤维细胞增殖，且能够抑制TGFβ1、CTGF表达。
羊膜取自人体胎盘，无血管、神经、淋巴管，上皮细胞不表达HLAA、B、C及DR抗原，动物实验及临床应用均显示了羊膜良好的组织相容性，几乎无排斥反应发生。本实验参照廖琼等［3］的方法制备羊膜匀浆上清液，测定上清液中蛋白总含量约为800?mg/L，推测其中含有某些细胞因子。Sato等［4］发现,羊膜匀浆中含有TGFβ1、TGFβ2、bFGF、HGF等细胞因子，这些细胞因子相互作用，加速白细胞的凋亡，达到清除炎症的效果，有利于功能性滤过泡的形成。羊膜上清液中可能存在的可溶性的抗新生血管的细胞因子，如色素上皮衍生因子、组织金属蛋白酶抑制物等［5］，均可强烈抑制新生血管形成。基质金属蛋白酶具有降解细胞外基质的重要作用，匀浆中的生物活性因子通过单一或网络的作用促进基质金属蛋白酶的合成和分泌，从而使MMP降解细胞外基质的作用增强，起到抑制术后纤维化、瘢痕形成的作用，通过上述作用保持滤过道通畅，形成功能性滤过泡。
TGFβ1是一种在伤口愈合过程中调节Fb活性的细胞因子，在滤过手术后的瘢痕修复过程中起着重要的促进作用。通过建立小鼠的角巩膜缘创伤模型，发现在伤口愈合过程中，TGFβ1术后2?d即开始表达，至5?d达到高峰，随之表达下降，推测青光眼滤过术的失败与TGFβ1早而高的表达有关［6］。CTGF是一种新发现的可刺激Fb增殖的细胞因子，与很多器官的纤维化有关, 实验证明兔眼滤过术后滤过泡组织中存在CTGF和TGFβ1的表达，且术后5d时表达量最高［78］，注入外源性的CTGF和TGFβ1降低滤过手术成功率，而应用CTGF和TGFβ1抗体可以减弱术后瘢痕形成［9］,提示在滤过泡疤痕形成过程中CTGF可能起重要作用。CTGF主要是通过升高细胞周期素A的水平促进细胞的增殖，以及通过促进整合素及层纤维蛋白的合成促进细胞外基质的合成，CTGF较其上游作用介质TGFβ作用更为单一，更加局限于纤维化的作用［10］。羊膜中HGF、BFGF、TGFβ1等活性因子［1112］通过下调Fb的TGFβ1、β2和TGFβⅠ、Ⅱ、Ⅲ型受体，以及整合素和肌动蛋白的表达［1314］，使由TGFβ1介导的肌成纤维细胞分化受到抑制，成纤维细胞生物学功能降低，从而减轻基质损伤修复和瘢痕形成。同时这些细胞因子，如FGF、HGF可以通过不同的机制下调CTGFmRNA的表达水平，起到抑制滤过泡纤维增生的作用,保持滤过道的通畅。
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