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Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达

http://www.cnophol.com 2009-12-18 11:25:30 中华眼科在线

  作者:王俊艳, 颜华, 王世忠, 李金茹, 刘皓

  摘要:目的:观察Survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达。方法:取已确诊为PVR并行玻璃体切除术患者的PVR增殖膜,标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回,取出增殖膜放入多聚甲醛固定,并常规乙醇脱水,二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备5μm连续切片,将切片行常规H-E染色,采用Survivin多克隆抗体(抗人及抗兔)行免疫组织化学实验,检测Survivin基因在玻璃体和增殖膜中的表达。结果:Survivin基因在PVR增殖膜中呈阳性表达,且随着PVR临床分级的增高,免疫组织化学染色阳性细胞百分率逐渐升高。结论:认为PVR的形成是由于Survivin基因的异常表达促进了细胞增殖,阐明PVR的形成机制。

  关键词:  Survivin基因;  增殖性玻璃体视网膜病变;  增殖膜

  Expression of Survivin Gene in Periretinal Membranes of Proliferative Vitreoretinopathy

  WANG Jun-Yan,  et al

  (Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China)

  Abstract: Objective: To study the expression of survivin gene in periretinal membrane of prliferative vitreoretinopathy(PVR). Method: 14 periretinal membranes obtained from 14 cases of PVR with retinal detachment undergoing vitretomy were used to examine the expression of surviving gene by SABC method. Result: Survivin gene was expressed in 8 of the 14 cases. The reactions of surviving were observed in the cytoplasm and extracellular matrix. Conclusion: The abnormal expression of surviving gene inhibits apoptosis and it may participate in the progression of proliferative vitreoretinopathy.

  Key words:  Survivin;  Proliferative;  Vitreoretinopathy

    增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是指在裂孔源性视网膜脱离或视网膜复位手术后,由于视网膜色素上皮细胞及神经胶质细胞的增生和收缩,又造成牵拉性视网膜脱离的病变。如不及时治疗,终将导致全视网膜脱离而失明。经过大量的实验和临床研究,已认为PVR属于眼内发生的过度损伤修复反应,这是一个以时相为特征的程序化过程,即经过了炎症期、增生期和瘢痕期,其形成的确切机制尚未完全明了。PVR的病理特征是细胞过度增生[1]。细胞增生与死亡失衡可能是PVR形成的原因。Survivin是一个新发现的凋亡蛋白抑制剂家族成员,广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织,但仅在少数正常成人组织中表达[2,3]。Survivin 具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能,是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子[4]。

  1  资料和方法

  1.1  一般资料:2004年7月至2005年6月确诊为孔源性视网膜脱离合并PVR并行玻璃体手术的病人14例。排除外伤性、糖尿病等引起的继发性视网膜脱离和系统性疾病。从玻璃体手术中取视网膜表面增殖膜,标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回,取出增殖膜放入多聚甲醛固定,并常规乙醇脱水,二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备5μm连续切片,将切片行常规H-E染色,采用Survivin多克隆抗体,行免疫组织化学实验,检测Survivin基因在玻璃体和增殖膜中的表达。

  1.2  方法:石蜡切片常规脱蜡至水,3%H2O237℃,30min,以阻断内源性过氧化物酶活性,正常兔血清湿盒内37℃封闭20min;滴加羊抗人survivin多克隆抗体,湿盒内4℃过夜,漂洗;滴加生物素化兔抗山羊IgG,湿盒内37℃,20min,漂洗;滴加SABC复合物,湿盒内37℃,20min,漂洗;DAB显色,显微镜下观察,水洗中止反应;脱水,透明,封片。将已知的乳腺癌切片作为阳性对照,用磷酸缓冲液代替一抗作为隐性对照,以组织切片背景清晰、胞质或胞核染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按显色强度分为3级:表达弱阳性,即显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;表达强阳性,即多数细胞呈黄至棕黄色染色;表达中度阳性,即显色强度介于弱阳性与强阳性之间。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。

  2  结果
  
  14例PVR增殖膜标本中,8例阳性,其中2例强阳性,4例中等阳性,2例弱阳性。在PVR增殖膜的细胞中,视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium, RPE)占较大部分,胞体变得长园,形态不规则。另外在增生膜中还见一些上皮细胞样和成纤维细胞样细胞。阳性染色位于膜上大部分细胞的胞质内,为棕黄色。阴性对照组中未见阳性染色。

  3  讨论
   
  PVR是一种细胞增生过度而凋亡过低的疾病。细胞凋亡是多细胞有机体为控制机体发育,维护内环境稳定,由基因控制的细胞主动死亡。Survivin是一个近年来发现的凋亡蛋白抑制剂(inhibitor of apoptotic protein,IAP)家族成员,广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织,具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能,是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子,几乎在所有被研究的肿瘤中均呈阳性表达。我们认为PVR虽然不同于肿瘤,但它在眼内局部发病情况与肿瘤的发病机理十分相似,均表现为细胞的过度增生。细胞的过度增生意味着细胞凋亡的减少,基于此,本实验从抑制细胞凋亡的Survivin基因着手,采用免疫组化技术,检测Survivin基因在PVR患者增殖膜中的表达,探讨其在PVR发病机制中的作用。为进一步通过反义核酸技术封闭Survivin基因,抑制玻璃体和视网膜细胞增生,在基因水平治疗PVR提供理论依据。

  参考文献:

  [1]  Esser P, Heimann K, Abts H, et al. CD95(Fas/Apo-1) antibody-mediated apoptosis of human retinal pigment epithelial cells[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1995,213:1026-1034.

  [2]  Ambrosini G, Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med, 1997,3(8): 917-921.

  [3]  Altieri DC, Marchisio PC, Machisio C. Survivin apoptosis: an interloper between cell death and cell proliferation in cancer[J]. Lab Invest, 1999,79(11): 1327-1333.

  [4]  赵文韬,王延庆.Survivin 的研究现状[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,2004,25(1):11-13.

  (天津医科大学组织胚胎学教研室,  天津  300070

  天津医科大学总医院眼科,  天津  300000)

(来源:互联网)(责编:xhhdm)

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