2  结果 

　　2．1  兔眼后发性白内障形成：①术后不同时期裂隙灯下观察：术后前3d前房内炎症反应明显，虹膜充血；术后1周可见前囊截缘出现白色环状混浊，但后囊尚透明；术后2周后囊呈薄纱状；1个月出现线条状混浊，2～3个月成条索状混浊，术后5个月后囊明显混浊。②HE染色：术后1周前囊下的上皮细胞向后囊扩展增殖；前囊下及赤道部的晶体上皮细胞多层化（见图1）。术后1个月后囊的晶体上皮细胞伸展形成与正常晶体同样走形的再生晶体纤维（见图2），此时的上皮细胞增殖只限于赤道部。1个月后后囊中央部几乎未见细胞成分；而术后1、2、3、5个月的标本中未见新的变化，再生晶体纤维逐渐增多。

　　2．2  免疫组织化学SP法检测MMP-2、MMP-9表达：MMP-2、MMP-9阳性表达为胞浆或细胞间质呈棕黄色，对照组晶体上皮细胞中未见明确的MMP-2、；MMP-9表达，见图3，实验组术后1～3个月MMP-2表达最明显（见图4、5），晶体上皮细胞胞浆及细胞间质中有棕色颗粒的MMP-2表达。

　　2．3  Zymography凝胶：正常对照组囊膜可见MMP-2、MMP-9呈淡条带，实验组MMP-2活性明显强于对照组（见图6），MMP-9无明显差异。各组MMP-2、MMP-9活性见表1。表1  各组MMP-2、MMP-9积分吸光度（A）值（略）

　　3  讨论

　　白内障术后因血—房水屏障破坏，术后短时间内可见房水闪辉出现，虹膜充血、后粘连等；晶体组织自身通过晶体上皮细胞增殖、分化、纤维化，企图修复愈合创面。本实验中观察到，术后第1天赤道部上皮细胞便开始增殖，沿前囊及后囊生长，长扁状的移行细胞开始出现于后囊表面；术后1周赤道部上皮细胞增殖达高峰；术后1个月后囊上的细胞变长、纤维化：2个月后赤道部上皮细胞增殖减弱。Gwon等还观察到［5］，晶体上皮细胞除正常在赤道部分化为晶体纤维，也可在前、后囊靠近前囊处分化为晶体纤维。因兔易发生后囊混浊及易于饲养管理，所以本实验选用2月龄白色幼兔，并采取开罐式截囊，但与人晶体上皮细胞不同，兔晶体上皮细胞合成新生的晶体蛋白能力特强，随着术后时间的延长，新生的晶体皮质增多，残存的晶体由术后1d的"空囊"，变为术后5个月的"扁椭圆形"。

　　基质金属蛋白酶是一组锌离子依赖的蛋白水解酶，它通过对细胞外基质成分的水解参与细胞外基质的降解［6］。MMPs主要由成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等合成与分泌。按作用底物不同分为4大类：间质胶原酶、Ⅳ型胶原酶（又称明胶酶，即MMP-2和MMP-9）、基质溶解酶和膜型基质金属蛋白酶。晶状体囊是一层包绕整个晶状体、具有弹性的透明基底膜，由胶原网状结构组成，组织间隙充满粘多糖［7］。主要成分为Ⅳ型胶原蛋白和层粘连蛋白，是MMP-2和MMP-9的特异性底物。有研究表明［8，9］，白内障囊外摘出术及人工晶体植入术后后囊膜混浊和纤维化与细胞增殖、细胞外基质沉积有明显关系。Seomun等［10］通过基因转染MMP-2，使晶状体上皮细胞过度表达MMP-2，MMP-2表达增强使晶状体上皮细胞发生纤维化。Kawashima等［11］通过免疫组化定位检测发现，在白内障摘除人工晶体植入术后早期，晶状体后囊可有MMP-1、MMP-2、MMP-9表达，从而推测MMPs可能与重建细胞外基质，调节晶状体上皮细胞功能及白内障的发病有关。本实验就晶状体术后后发性白内障形成和发展过程中MMPs进行研究，发现实验组MMP-2于术后1～3个月表达最明显；Zymography凝胶中对照组可见MMP-2、MMP-9显淡条状，实验组MMP-2活性明显强于对照组（电泳图），MMP-9无明显差异。各组MMP-2活性明显增强，尤为1～3个月；MMP-9活性无明显变化。术后1～3个月正是晶状体上皮细胞增殖减弱、晶状体后囊纤维化逐渐增强的时期，由此可以推断，MMP-2参与晶状体的创伤修复，即后发性白内障的形成，它在修复组织向正常组织形态转变的重塑过程中起作用，而MMP-9在创伤修复过程中可能不起关键作用。

　　MMPs调控着ECM代谢。正常情况下ECM处于不断产生和不断降解的动态平衡中，在病理状态下ECM产生和（或）ECM降解失衡导致ECM过多堆积。ECM在透明的晶体后囊膜上沉积，不但可作为晶体上皮细胞生长增殖的支架，而且还起促进晶体上皮细胞增殖、移行和粘附的作用。本实验中正常兔眼晶状体囊膜Zymography凝胶可见MMP-2、MMP-9显淡条状，说明在生理状态下MMPs可能在保持晶状体囊膜的透明性上有一定的意义。术后1周～1个月是细胞增殖的高峰期，必然分泌大量的细胞外基质，以修复创口，以后细胞增殖能力减弱，但依然持续至数月（5个月）。ECM大量堆积，机体通过调节，使MMPs产生增多以降解ECM，但是被动的，在时间上落后于细胞增殖过程，推测在量上也不能完全降解ECM，ECM的产生多于降解，最终ECM堆积过多，囊膜纤维化产生后发性白内障。因此后发性白内障是晶体上皮细胞增殖修复过程中ECM堆积，MMPs降解调控ECM"失败"的结果。MMP-2、MMP-9虽同属明胶酶，在水解底物上无明显差异，但在晶状体中可能有不同的分工，在后发性白内障形成过程中，MMP-2可能起着更重要的作用。

　　【参考文献】

　　［1］袁发焕．细胞外基质、基质金属蛋白酶及其抑制因子的研究进展［J］．国外医学·临床生物化学与检验学分册，2000，21（2）：62．

　　［2］HassTL，Davis SJ，Madri JA．J Biol Chem，1998，273(6)：3604．

　　［3］戴南平．兔眼人工晶体植入后房水基质金属蛋白酶及其抑制因子活性的动态变化［J］．眼科研究，2003，21（1）:8．

　　［4］李红梅．不同转移潜能的人肿瘤细胞系金属蛋白酶活性分析［J］．中华病理学杂志，1998， 27（5）：356.

　　［5］Gwon AE，Gruber LJ，Mundwiler KE．A histologic study of lens regeneration in aphakic rabbits［J］．Invest Ophthalmol Vis Sci，1990，31(3)：540．

　　［6］Kossakowska AE，Edwards DR，Lee SS，et al．Altered balance between matrix matalloproteineses and their inhibitors in experimental biliary fibrosis［J］．Am J Pathal，1998，153(6):1895．

　　［7］张振平．晶状体病学［M］．广州：广东科技出版社，2005：5～7.

　　［8］Hales AM，Chamberlain CG，Dreher B，et al．Intravitreal injection of TGFbeta induces cataract in rats［J］．Invest Ophthalmol Vis Sci，1999，40：3231．

　　［9］Liu J，Hales AM，Chamberlain CG，et al．Induction of cataractlike changes in rat lens epithelial explants by transforming growth factor beta［J］．Invest Ophthalmol Vis Sci，1994，35：388．

　　［10］Seomun Y，Kim J，Lee EH，et al．Overexpression of matrix metalloproteinase-2 mediates phenotypic transformation of lens epithelial cells［J］．Biochem J，2001，358:11．

　　［11］Kawashima Y，Saika S，Miyamoto T，et al．Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of matalloproteineses of fibroushumans lens capsules with intraocular leuses［J］．Curr Eye Res，2000，21:962.

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