牛静宜   任胜卫   谢立信   王宜强

山东省眼科研究所   266071

目的：人类多数角膜营养不良由TGFBI突变致沉积物形成所引起，但具体的分子和细胞机制尚不清楚。本研究利用小鼠野生型TGFBI及R124三个常见突变体的真核表达载体转染角膜基质细胞，帮助了解TGFBI突变致病的分子机制。

方法：通过反转录PCR和基因拼接方法获得小鼠TGFBI的野生型及三个常见R124突变体，并克隆入真核表达载体pcDNA3.1。从正常2周龄小鼠眼球采用diapase酶消化法制备角膜基质细胞并进行原代培养。用重组载体质粒转染角膜基质细胞，观察细胞的形态变化及real time PCR检测转染后TGFBI基因及基质相关功能基因的表达变化。

结果：重组质粒转染基质细胞后，检测到TGFBI野生型及其突变基因的表达；同时检测到胞外基质蛋白（extracellular matrix protein）ecm1及晶体蛋白基因（crystalline）cryaa、cryba1、crybb2表达增加而角膜基质重塑相关基因（matrix-remodelling associated 7）mxra7表达减少，基质金属蛋白酶（matrix metallopreoteinases mmps）mmp3、mmp13表达增加而其抑制剂基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases timps）timp3表达下降。

结论：TGFBI基因或其突变体的异常表达能够影响胞外基质中塑形相关基因的表达。推测可以引起基质塑形过程发生改变，从而引起角膜异常蛋白的沉积，引起角膜营养不良表现。