2.2　胎儿LEC原代长期培养观察　原代胎儿晶状体上皮细胞约经10d培养后细胞发生融合，不给予消化传代，每隔2～3d换液1次继续培养，细胞生长逐渐密集，呈现复层样生长，培养至6wk时可见有细胞呈同心圆环绕的小球状体结构的形成，小球体内无细胞成分，Gimsa染色呈粉红色外观(图5)。

　　Figure 5　The growth status of cultured primary fetus lens epithelial cells for long than 6 weeks displayed,×200LM　原代胎儿晶状体上皮细胞培养至6wk的观察,×200LM

　　2.3　细胞生长曲线的测绘　根据对小牛、兔、胎儿第2代不同培养时间的细胞计数，绘制出各自的生长曲线，并求出各自的细胞倍增时间，分别为24、24.5和26h；同时也绘制了第2代3种不同年龄人晶状体上皮细胞的生长曲线，求出各自的细胞倍增时间，分别为29、32和33.5h。而人晶状体上皮细胞供体的年龄与细胞倍增时间二者之间呈负相关，其相关系数为r=-0.996。

　　3　讨论

　　细胞培养是细胞生物学研究中最常用的方法之一。由于在体外培养中或在机体内，细胞的生物学行为基本规律是一致的，因此可以在体外对培养的细胞结构和功能进行诸多研究，特别是可以有目的、有选择地控制细胞的生长环境，研究在某种特殊条件下的细胞生物学行为。早在1958年Mamo首先用鸡胚晶状体上皮细胞进行了体外培养，研究其生长特点；随后Mager、Redden等又介绍了牛、兔、人晶状体上皮细胞的培养方法和特点［1，2］。

　　正常生理状态下，晶状体上皮细胞是被包裹在一封闭受限的基底膜囊内，选用晶状体囊膜组织片进行晶状体上皮细胞培养，可望获得一单纯不受其它细胞相混杂的纯细胞株；但是根据晶状体上皮细胞体外培养所确定的生长特性是属于贴壁生长的有限生长的细胞系，每开展一项研究都需进行原代培养，作为对实验研究对象的可靠性、科学性的论证，细胞株的确定需有客观的依据。根据晶状体上皮细胞具有特异高丰度的晶状体蛋白的表达，国内秦红等［3］应用分子生物学技术，对培养的晶状体上皮细胞所转录出的α-、β-晶状体蛋白的mRNA进行检测，以确定晶状体上皮细胞株。该方法具有较高的特异性，但实验操作复杂，必需具备一定的实验条件。Arita等［4］在对人晶状体上皮细胞体外培养中观察发现：人晶状体上皮细胞经长期培养(40～50d)后，在培养的单层晶状体上皮细胞中有“透镜小体”的形成；该“透镜小体”是属于哺乳类晶状体纤维分化所呈现的特有表现，是晶状体上皮细胞表达的γ-晶状体蛋白和MP26蛋白产物。随后的观察还发现：在长期培养的晶状体上皮细胞中，除有“透镜小体”的存在外，还有由细胞环绕的“晶状体小体”的存在，其成分是属于构成基底膜的物质，它也是体外培养的晶状体上皮细胞所表现的另一特征［5］。本实验中，胎儿晶状体上皮细胞原代经6wk的长期培养，在培养的晶状体上皮细胞中发现有“晶状体小体”的形成；并且该“晶状体小体”经Gimsa染色后是一无细胞成分，呈粉红色外观的结构。因此可根据形成的“晶状体小体”特征性表现作为确定晶状体上皮细胞株的可靠性依据。

　　对不同种属来源的晶状体上皮细胞生长潜能的了解，是进行深入研究晶状体上皮细胞生物学行为的先决条件。在本研究中，同时期对牛、兔、胎儿和不同年龄人的晶状体上皮细胞进行了体外培养，观察各自在体外的生长、分化规律。在同样的培养条件下，当囊膜组织贴壁后，来自牛、兔晶状体上皮细胞的生长增殖速度明显比来自人的晶状体上皮细胞快，该增殖速度可保持到第4代，但它们的细胞形态在传代至第3代后就开始发生改变，出现向成纤维细胞的转化；而人晶状体上皮细胞传代至第4代时细胞的表型也开始发生改变。牛、兔和人晶状体上皮细胞传代至第6～7代后，生长增殖速度均减慢，细胞体增大，至第8代时，细胞体内网状结构及空泡样改变增多，晶状体上皮细胞老化，生长基本停滞，说明体外培养的牛、兔、人晶状体上皮细胞具有相类似的有限生长特性，但牛、兔晶状体上皮细胞的生长增殖速度比人晶状体上皮细胞的快；同时，牛、兔晶状体上皮细胞也比人晶状体上皮细胞易于发生去分化向成纤维细胞转化，为确保实验结果的可靠性、准确性，尽量不宜用已发生转化的晶状体上皮细胞作为研究的实验对象。

　　此外，晶状体上皮细胞所具有的多种生理活性是通过它生长繁殖后才表现出来，研究晶状体上皮细胞生长增殖能力有助于更多的了解晶状体上皮细胞所固有的各种特性。Redden等［6］对体外培养的兔晶状体上皮细胞观察发现：晶状体上皮细胞的增殖能力与动物的年龄呈负相关。来自临床回顾性的调查发现：白内障术后后囊膜混浊的发生也与年龄密切相关，年龄越小，发生率越高。本实验通过对体外培养不同年龄的人晶状体上皮细胞生长情况的观测结果发现：体外培养的人晶状体上皮细胞的生长增殖能力同样与供体的年龄呈负相关关系，年龄越大，晶状体上皮细胞的生长增殖能力越低；这与临床上所观察到的结果相一致。

　　本文通过对同等条件下培养的来自3种不同种属的晶状体上皮细胞进行研究，观察它们各自在体外生长、分化规律，这有助于我们对晶状体上皮细胞各种生物学行为的进一步认识；随着对晶状体上皮细胞结构和功能研究的深入，将更增进人们对晶状体上皮细胞在白内障囊外摘出术后后囊膜混浊形成过程中作用的了解，同时对寻找有效措施防治该并发症的发生具有重要的意义。

　　注释：吴　强，现在上海市第六人民医院眼科

　　基金项目：国家自然科学基金资助(NO.39270707)

　　作者简介　吴　强，男，1964年7月出生，江苏人，汉族，1985年毕业于昆明医学院医疗系，获医学学士学位；1991年在曾令柏教授的指导下进行了青光眼视野损害的临床基础研究，1994年获医学硕士学位，同年又进入上海第二医科大学眼科专业继续深造，师从陆道炎、王丽天、陈才根、王康孙等国内著名的眼科专家，致力于白内障囊外摘出术后后囊膜混浊发生的病理机制及防治的研究，于1997年获医学博士学位。现已发表学术论文9篇；曾先后获得西南地区大学生科技成果二等奖1项，省科技进步成果三等奖2项，省卫生厅科技进步成果三等奖1项，第二届全国中青年眼科学术研讨会优秀论文一等奖，全国“科林”杯眼科学学术论文特等奖，同时也获得了全额资助参加第17届亚太地区眼科学术会议。

　　参考文献

　　1　Bermbach G.Human lens epithelial cell in tissue culture.Exp Eye Res 1991;52∶113-121.

　　2　Reddan JR,McGee SJ,Goldenberg EM.Both human and newborn rabbit lens epithelial cells exhibit similar limited growth properties in tissue culture.Cur Eye Res 1983；2(6)∶399-404.

　　3　秦　红，赵光喜，吴惠群.Wistar大鼠、乳鼠晶状体上皮细胞的原代培养与鉴定.眼科新进展 1995；15(3)∶2-3.

　　4　Arita T,Murata Y,Lin LR,et al.Synthesis of lens capsule in long-term culture of human lens epithelial cells.Invest Ophthalmol Vis Sci 1993;34(2)∶355-362.

　　5　Olivero DK,Furcht LT.Type IV collagen,laminin,and fibronectin promote the adhesion and migration of rabbit lens epithelial cells in vitro.Invest Ophthalmol Vis Sci 1993;34(10)∶2825-2834.

　　6　Redden JR,Dziedzic DC,Mostafapour MK,et al.Establishment and characterization of a lens epithelial cell line from and eight year old rabbit.Cur Eye Res 1983;2(9)∶633-639.

收稿日期：1998-08-10；修回日期：1999-02-23

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