中华眼科杂志 1999年第6期第35卷 眼底病
作者：王方 颜永碧 张皙 蔡文泉
单位：王方、张皙、蔡文泉 200080上海市第一人民医院眼科；颜永碧 第二军医大学生物物理所
关键词：视网膜；；显微镜检查；电子
【摘要】 目的 探讨视网膜表面收缩膜细胞与胶原作用的超微结构特征及细胞外间质的作用。方法 对16例孔源性视网膜脱离伴增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）患者行玻璃体切除术，并应用免疫胶体金标记技术对术中获得的视网膜表面膜进行细胞外间质（extracellular matrix，ECM）——Ⅰ和Ⅲ型胶原及纤维粘连蛋白（fibronectin，FN）的免疫电镜观察。结果 在9例视网膜表面膜标本中可见一种足突细胞，这些足突呈卷曲或树枝样，周围被Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维包绕；其细胞外形不同、细胞器丰富、带有或不带有色素颗粒；在足突与胶原接触区FN标记明显。结论 PVR膜收缩很可能是上皮样细胞伸出足突介导胶原纤维作用的结果，且FN参与PVR膜收缩过程。
Ultrastructural characteristics of epiretinal membranes
WANG Fang*, yAN Yongbi, ZHANG Xi, et al.*Department of Ophthalmology, Shanghai First Hospital, Shanghai 200080
【Abstract】 Objective To investigate ultrastructural features and the correlation between the cell activation and extracellular matrix (ECM) expression of epiretinal membranes. methods Immuno-electron-microscopy was done on the epiretinal membranes removed by vitrectomy from 16 patients with rhegmatogenous retinal detachment associated with proliferative vitreoretinopathy (PVR). The specimens were stained with antibodies to ECM proteins, including type Ⅰ collagen, type Ⅲ collagen and fibronectin (FN). Results A type of cells with a number of lamellipodia was found in membrane sections of 9 patients. The lamellipodia appeared to be either coiled or branched and were surrounded by abundant collagen fibers of type Ⅰ and Ⅲ. The cells with lamellipodia varied in their phenotypes and with or without pigment. There were dense gold particles of FN in contact regions of lamellipodia and collagen. Conclusions Our observations support that the contraction of epiretinal membranes is the result of an interaction between cells and collagen, and the cells extending lamellipodia may initiate contractile events. FN is responsible for this contractile action.
【Key words】 Retina Microscopy, electron
增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy, PVR）是导致孔源性视网膜脱离手术失败的主要原因［1］。研究PVR的发生及作用机制一直是眼科学者们关注的焦点［2，3］，并已取得了许多令人鼓舞的结果［4-8］。Glaser等［4］应用定时显微电影摄影技术观察发现，视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞以伸足突方式拽拉胶原纤维产生收缩。为了解PVR膜组织中足突细胞的分布以及与胶原纤维的关系，我们于1996年12月至1997年12月对直接在孔源性视网膜脱离伴PVR患者的视网膜表面膜组织进行3种抗细胞外间质（extracellular matrix，ECM）的免疫电镜观察，试图研究视网膜表面膜组织中细胞与胶原作用的超微结构特征及细胞外间质的作用。
材料和方法
1. 标本来源：取本院16例孔源性视网膜脱离伴有PVR患者的视网膜表面膜组织（星状皱襞膜和黄斑表面膜），均于玻璃体切除手术获得；术中应用组织镊剥离膜组织，经湿棉签迅速过渡到消毒的生理盐水中，随即用吸管转入专用固定液中固定备用。
2．免疫电镜标本制作：标本于新鲜配制的2％多聚甲醛＋0.5％戊二醛（0.2 mol/L PBS缓冲液配制，pH＝7.3）固定液中，置室温下固定0.5 h，PBS缓冲液漂洗数次后，加入一抗：包括抗Ⅰ型胶原（1∶50，兔抗牛IgG，上海医科大学病理解剖教研室提供）、抗Ⅲ型胶原（1∶50兔抗人IgG，来源同前）和抗纤维粘连蛋白（fibronectin， fN；1∶200，兔抗人，丹麦Dako公司），于4℃孵育，冰箱过夜；室温复温2 h，0.1 mol/L PBS缓冲液漂洗数次后，1∶3稀释胶体金标记物（10 nm）振荡、置35℃孵育2 h。阴性对照标本用PBS缓冲液代替第一抗体，其余处理相同。标本继续用PBS缓冲液漂洗后，均再经2％戊二醛微波固定5 s，室温放置30 min，继续漂洗，1％四氧化锇后固定2 h，再用双蒸馏水漂洗，逐级酒精脱水，Epon812包埋标本，先制成0.2 μm的半薄切片，并在相差倒置显微镜下定位，最后制成500～700?超薄切片，铀铅双重染色，H-800透射电镜观察。
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