讨论

　　一、RT-半定量PCR技术在POAG病因研究中的应用

　　RT-PCR技术是从少量细胞中提取总RNA,扩增大量特异性DNA序列。Tripathi等^［2］于1993年首次选用RT-PCR技术,从有限的培养小梁细胞中提取总RNA,通过扩增特异性DNA序列以了解小梁细胞是否表达TGF-β₁的mRNA等。本组设立内参照和测定PCR产量电泳带光密度吸收值等,对RT-PCR产量进行半定量分析,以了解TGF-β₁对β-肌动蛋白mRNA表达的影响,将定量研究引入POAG病因研究中,为这一研究领域提供了一种有效实用的研究手段。

　　二、TGF-β₁对微丝肌动蛋白的正调节效应

　　本组研究结果表明,TGF-β₁使培养的人眼小梁细胞张力纤维束增多,F-肌动蛋白含量增加,β-肌动蛋白mRNA增强，其转录水平和翻译水平结果一致;与TGF-β₁对其他非肌肉细胞微丝肌动蛋白的影响也一致^［3］。Tamm等^［4］发现,TGF-β₁对培养的人和猴眼小梁细胞α-肌动蛋白mRNA表达增强,使小梁细胞向肌成纤维细胞方向转化。这表明TGF-β₁对小梁细胞微丝肌动蛋白正调节效应为多方面。此种正调节机制尚不清楚,可能发生在转录水平。

　　三、TGF-β₁对房水引流的调节

　　有资料表明，培养的猪眼小梁细胞可产生TGF-β₁、β₂,其细胞膜上存在有与之相结合的受体^［2,5-7］。TGF-β₁参与小梁网房水引流的功能活动,可能通过增加小梁网细胞外基质堆积等使房水引流阻力增加;也可能通过加强小梁细胞的收缩与运动功能,使房水引流阻力降低。在一定范围内,TGF-β₁上调培养的小梁细胞微丝肌动蛋白,使细胞收缩与运动能力适当增强,利于房水引流;如果细胞收缩与运动能力过度增强,使小梁网挛缩,失去弹性,孔闭锁等，则不利于房水引流。因此,TGF-β₁必须使小梁细胞的收缩和运动功能与小梁网房水引流功能相协调,才能调节眼内压在正常范围。反之则可能使眼压升高,导致POAG发生。

　　四、TGF-β₁在高浓度、作用时间延长时对培养的人眼小梁细胞形态与生长增殖的影响

　　TGF-β₁在高浓度、作用时间延长时,使汇合前的细胞生长增殖抑制,细胞膜破裂,细胞脱落;而对汇合后的细胞影响则不明显。TGF-β₁对生长增殖旺盛的汇合前细胞抑制作用明显,而对生长增殖缓慢或停止的汇合后细胞抑制作用不明显,这与对小梁细胞生长增殖产生刺激作用的成纤维细胞生长因子作用机制相似。

　　参考文献

　　1　Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate phenol chloroform extraction. Anal Biochem, 1987,162:156-159.

　　2　Tripathi RC, Li JP, Borisuth NSC, et al. Trabecular cells of the eye express mRNA for TGF-β₁ and secrete this cytokine. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1993,34: 2562-2569.

　　3　Wao PL,Cha HH,Singer KL, et al.Antagonistic regulation of f%26igrave;ght junction dynamics by glucocorticoids and TGF-β in mouse mammary epithelial cells. J Biol Chem, 1996,27:404-412.

　　4　Tamm ER,Siegner A,Baur A,et al. TGF-β₁ induces α-smooth muscle-actin expression in cultured human and monkey trabecular. Exp Eye Res, 1997, 62: 389-397.

　　5　Tripathi RC,Chan WFA,Li JP,et al.Trabecular cells express the TGF-β₂ gene and secrete the cytokine. Exp Eye Res, 1994, 58:523-528.

　　6　Tripathi RC,Borisuth NSC,Kolli SP, et al.Trabecular cells express receptors that bind TGF-β₁ and TGF-β₂:a qualitative and quantitive characterization. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1992,34:260-263.

　　7　Borisuth NSC,Tripathi BJ, Tripathi RC. Identification and partial characterization of TGF-β₁ receptors on trabecular cells. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1992, 33:596-603.

(收稿：1998-10-26　　修回：1999-02-13)

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