中华眼科杂志 1999年第1期第35卷 论 著
作者：熊新春 杜蜀华 吕源淑 魏厚仁
单位：熊新春 吕源叔 魏厚仁（430022 武汉，同济医科大学附属协和医院眼科）;杜蜀华（附属同济医院眼科）
关键词：干扰素Alpha-2b；青光眼；受体；表皮生长因子-尿抑胃素
【摘要】 目的 探讨干扰素α-2b(interferon alpha-2b,IFNα- 2b)对结膜下瘢痕形成的抑制作用机理和青光眼滤过术后的应用方式。方法 采用免疫组织化学PAP法检测IFNα-2b对体外培养的牛结膜下成纤维细胞表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)受体的影响，并用IBAS(image biological analysis system)图像分析系统定量分析；观察IFNα-2b对36只兔眼结膜下置线引起的瘢痕中胶原含量的影响及18只兔眼小梁切除术后房水蛋白的变化。结果 IFNα-2b具有减少成纤维细胞表达EGF受体的作用，其量效关系为：Y=2953.8-554.5 lgx(r=-0.98，P＜0.01)。4.67×10-5μmol/L IFN α-2b不仅能够减少缝线引起的瘢痕中胶原含量的1/2左右，且能显著降低小梁切除术后的房水蛋白浓度。结论 IFNα- 2b可望作为青光眼滤过术后辅助用药，并在诸多方面优于抗代谢类药物。
A study of interferon alpha-2b as an accessory
drug after glaucoma filtration surgery
XIONG Xinchun*, DU Shuhua, L Yuanshu, et al. *
Department of Ophthalmology, Union Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 430022
【Abstract】 Objective To elucidate the inhibitory action of interferon alpha-2b (IFN α-2b) on the cicatrization under conjunctiva and the best way to use it after glaucoma filtration surgery.Methods Immunohistochemical PAP method and image biological system 2000 (IBAS 2000) were utilized to quantitatively analyze the inhibitory effect of IFN α-2b on the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) of cultured calf fibroblasts; the effects of IFN α-2b on collagen contents in suture-caused cicatrization under conjunctiva and changes of aqueous humor protein after trabeculectomy performed on rabbits have also been observed.Results IFN α-2b reduced the expression of EGFR of cultured bovine fibroblasts at a dose-dependent manner. The relationship between the EGFR and the dosage of IFN α-2b is Y=2953.8-554.5 lgx (r=-0.98, P＜0.01). With 4.67×10-5 μmol/L IFN α-2b not only reduced about 50% of the collagen in suture-caused cicatrization, but also significantly decreased the protein concentration of aqueous humour 3 and 72 hours after trabeculectomy.Conclusion It is promising that IFN α-2b can be used after glaucoma filtration surgery to reduce excessive cicatrization with many advantages compared with antimetabolites.
【Key words】 Interferon Alpha-2b Glaucoma Receptors, epidermal growth factor-urogastrone
结膜下瘢痕组织增生是抗青光眼滤过术后失败的主要原因，其主要病理过程包括局部成纤维细胞增殖、胶原基质产生及血管新生。其中包括表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在内的各种细胞因子在瘢痕形成中起着重要作用［1］。降低局部生长因子水平或减少细胞生长因子受体表达是抗瘢痕形成的途径之一。生物制剂干扰素α-2b (interferon alpha-2b,IFN α-2b)具有抗多种细胞增殖、减少瘢痕形成的能力，本实验旨在探讨IFN α-2b作为青光眼滤过术后辅助用药的可能性。
材料与方法
1.用免疫组织化学PAP法测定细胞EGF受体：将体外培养的牛结膜下成纤维细胞按2×105个/瓶接种入置有载玻片的15 ml培养瓶中，共18瓶。准确加入RPMI-1 640培养液(美国Gibco公司产品)4 ml，37℃下保存18小时后，将细胞瓶分为6组，每组3瓶，加入IFN α-2b使终浓度分别为0，1.55×10-5、1.55×10-4、1.55×10-3、1.55×10-2及2.33×10-2 μmol/L；继续培养48小时后取出载玻片，冰丙酮固定，过氧化氢甲醇阻断内源性过氧化物酶。采用PAP法检测EGF受体，Ⅰ抗为鼠抗EGF受体单抗(军事医学科学院产品)，Ⅱ抗为羊抗鼠IgG和鼠PAP(同济医院临床免疫室产品)。分别用鼠肝切片和PBS液代替Ⅰ抗作阳性和阴性对照。
2.用生物图像分析系统IBAS 2000(image biological analysis system 2000，德国Opton公司产品)定量分析EGF受体：组织培养切片放大250倍，彩色摄像镜头将随机选取的5个视野输入计算机，计算每个视野中5个边界较清晰的成纤维细胞表面棕黄色光点的面积。每种浓度重复检测3次。采用直线回归法分析IFN α-2b与EGF受体间的关系。
3.测定缝线引起的结膜下瘢痕中胶原含量：体重约3 kg大耳白兔18只(36只眼)，随机分为3组，氯胺酮麻醉，于12点钟处距角巩缘3 mm处剪开球结膜，放置已消毒的长0.5 cm 7号丝线，9-0尼龙线缝合1针。(1)1组6只兔(12只眼)置线后作为对照；(2)2组6只兔(12只眼)置线后立即线下注射4.67×10-5 μmol/L IFN α-2b 0.05 ml 1次；(3)3组6只兔(12只眼)置线后线旁3 mm处注射4.67×10-5 μmol/L IFN α-2b 0.05 ml 1次。7天后处死每组兔半数，其余兔14天全部处死。取线周组织用Bouin液固定，石蜡切片，Masson's三色染色,IBAS 2000真彩色系统定量检测其蓝色胶原纤维含量[2]。统计学处理采用t检验。用免疫组织化学PAP法检测组织切片中EGF受体。
4.IFN α-2b对小梁切除术后房水蛋白的影响：大耳白兔9只(18只眼)，随机分为3组，于氯胺酮麻醉下行小梁切除术。(1)1组3只兔(6只眼)术后立即于滤过泡下注射生理盐水0.05 ml 1次，作为对照；(2)2组3只兔(6只眼)术后立即滤过泡下注射IFN α-2b 4.67×10-5 μmol/L 0.05 ml 1次；(3)3组3只兔(6只眼)术前24小时于术区注射IFN α-2b 4.67×10-5μmol/L 0.05 ml 1次。各组术后3，24，72，240小时前房穿刺抽取房水0.05 ml；另抽取3只正常兔(6只眼)房水0.05 ml，3小时后再次抽取房水0.05 ml。双缩脲法测蛋白，并观察术后反应。统计学处理采用t检验方法。
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