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3 讨论
由于白内障手术破坏了血-房水屏障，术后早期炎症反应引入大量炎性细胞、炎性因子，改变了房水成分。有报道巨噬细胞调理液可促进晶状体上皮细胞增殖［4］，而巨噬细胞被激活后早期主要合成分泌TNF-α。我们利用重组人TNF-α发现，1U／mlTNF-α即可明显促进体外培养的牛、人晶状体上皮细胞增殖，且可持续至72h［1］。为了解TNF-α的分子机制，我们采用ABC免疫酶标法研究TNF-α作用后几种原癌基因蛋白的表达情况。
癌基因指逆转录病毒核酸中可以引起细胞发生转化的一段核苷酸序列，正常细胞中与病毒癌基因序列同源的基因称原癌基因，可大致分为生长因子型、信号转导型、核蛋白型等几大类［5］。本文结果表明，TNF-α作用后，晶状体上皮细胞中fos，jun，myb，myc，ras等原癌基因表达的阳性细胞百分率明显升高（P＜0.01），但各种蛋白的升高时相不同。TNF-α作用1h后，fos，jun，myb，ras等蛋白的表达即达到高峰，以后逐渐下降，jun和ras在4h基本恢复正常，fos和myb到8h恢复正常。myc基因则启动较慢，TNF-α作用2h后其蛋白水平升至最高峰。
ras蛋白相对分子质量为21×103，具有GTP酶活性，在转导生长因子受体激发的信号上起作用。在多种肿瘤中检测到ras基因的各种突变型，这些突变的ras蛋白可使细胞不再依赖生长因子而持续增殖。c-fos，c-jun，c-myb，c-myc基因均编码核蛋白，参与细胞周期的调控。fos，jun蛋白具有亮氨酸拉链结构，二者可形成异二聚体，与DNA序列中AP-1位点结合，启动基因转录。jun蛋白自身也可形成二聚体，但转录活性较弱。myb与fos蛋白一样为核内磷酸蛋白，与DNA结合后调节转录。已经发现在一些恶性肿瘤中有myb基因的重排和过度表达。c-myc基因是当逆转录病毒启动子／增强子插入而产生肿瘤性活化时被发现的第一个癌基因，属细胞周期早期基因，受到刺激后比c-fos，c-jun等晚一些达到顶峰。
图2 TNF-α作用不同时间细胞内fos蛋白的表达。（a）对照（b）1h（c）8h（ABC法，×120）
Fig．2 Immunohistochemical staining of fos protein product in LECs（magnification×120）．（a）control；（b）1h with TNF-α；（c）8h with TNF-α．The cell nucleus was stained blue，positive reaction produced a yellow or brown color．Compared with（a），there were more positive cells in（b）．The stained area enlarged，and the reaction color also deepened．More changes located in nucleus．
图3 TNF-α作用不同时间细胞内jun蛋白的表达。（a）对照（b）1h（c）4h（ABC法，×120）
Fig．3 Immunohistochemical staining of jun protein product in LECs（magnification×120）．（a）control；（b）1h with TNF-α；（c）4h with TNF-α．The cell nucleus was stained blue，positive reaction produced a yellow or brown color．Compared with（a），there were more positive cells in（b）．The stained area enlarged，and the reaction color also deepened．More changes located in nucleus．
我们先前的实验表明，TNF-α作用后24h，晶状体上皮细胞增殖明显，可持续至72h。本文结果，原癌基因蛋白在TNF-α作用1～2h后达到顶峰，4～8h后即恢复正常，为一过性表达。可以认为，TNF-α与细胞表面受体结合后，激活了ras蛋白的GTP酶活性，经一系列细胞内信号途径，激活核内原癌基因表达，调节DNA转录，推动细胞周期运行。
参考文献
1，张晓红，李筱荣，孙慧敏，等．肿瘤坏死因子α和表皮生长因子对体外培养的晶状体上皮细胞增殖的作用．眼科研究，1998，16∶ 90
2，Wu KF，Rao Q，Zheng GG，et al．Enhancement of J6-1 human leukemic cell proliferation by cell-contact： Role of an M-CSF-like membrane-associated growth factor MAF-J6-1．Leuk Res，1994，18∶ 843
3，倪宗瓒，主编．医学统计学．北京：人民卫生出版社，1990．238-248
4，胡明，郝燕生，惠延年，等．巨噬细胞对培养兔晶状体上皮细胞增殖率及DNA合成率的影响．中华眼科杂志，1995，31∶ 296
5，周廷冲，马贤凯，唐佩弦，等．多肽生长因子基础与临床．第1版．北京：中国科学技术出版社，1992．543-560
收稿：1999－05－16
修回：2000－02－15 上一页 [1] [2] |
