作者：赵平 周忠友 李慎乐 白瑜 作者单位：050051 石家庄市，河北医科大学第三医院眼科
【摘要】 目的 研究制首乌、北沙参、紫丹参通过保肝抗衰老，预防白内障的作用。方法 用D半乳糖将2个月龄大鼠制成衰老模型，然后用制首乌、北沙参、紫丹参三味药灌胃，40 d后检测衰老大鼠晶状体组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSHPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(maleic dialdchyde,MDA)的活力和含量，并借助电子显微镜观察肝细胞凋亡的形态学变化。结果 中药治疗组晶状体中GSHPx、SOD的活力较衰老模型组明显增加(P<0.01)，MDA的含量较衰老模型组明显降低(P<0.01)。且通过对肝细胞超微结构的观察表明：此三味中药能明显抑制肝细胞的凋亡。结论 制首乌、北沙参、紫丹参三味药联和应用具有改善肝细胞活性，抗衰老，延缓白内障发生的作用。
【关键词】 制首乌；北沙参；紫丹参；白内障；脂质过氧化；肝细胞
Experimental study on the preventive effect of Radix polygoni multiflori preparata,Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae on cataract ZHAO Ping, ZHOU Zhongyou, LI Shenle, et al. Department of Ophthalmology, The Third Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050051
【Abstract】 Objective To observe the preventive effect of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae on cataract by protecting liver and antiaging.Methods Aging models of rats were made by hypodermicly injecting Dgalactose into 2monthold rats’ back of neck. The rats were given the decoction of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae by gastric infusion. The activities of glutathione peroxidase (GSHPx), superoxide dismutase (SOD) and maleic dialdehyde (MDA) in the aging rats’ lens were detected, and the morphological changes in liver cells were observed by transmission electronic microscope after 40 days.Results The activities of GSHPx and SOD in TCM group were increased significantly, as compared with those in aging model group(P<0.01), and the content of MDA in TCM group was decreased significantly, as compared with that in aging model group(P<0.01). The observation results of ultrastructure of liver cells showed that Chinese herbs could inhibit apoptosis of aging rats’ liver.Conclusion The combined application of Radix polygoni multiflori preparata, Coastal glehnia root and Radix salviae miltiorrhizae plays an important role in improving the activity of liver cells, antiaging and delaying process of cataract.
【Key words】 Radix polygoni multiflori preparata; Coastal glehnia root; Radix salviae miltiorrhizae; cataract; lipid peroxide; liver cell
白内障是全球第一位的致盲眼病，随着我国人口的老龄化，白内障的发病率在不断上升。越来越多的实验证实白内障的发生与晶状体中自由基增多所致的脂质过氧化反应增强和抗氧化功能下降关系密切［1］。因此，寻找终止或抑制晶状体脂质过氧化反应的方法，将有利于延缓和预防白内障的发生和发展。此外，从中医的角度来看，白内障属肝肾阴虚，精血不足，不能上荣于目所致［2］。大量中西医研究证实，制首乌、北沙参、紫丹参三味中药不仅具有滋补肝肾，养血明目之功效，而且是抗脂质过氧化的良药，本实验将三者配伍，通过观察其保护肝细胞、抑制晶状体脂质过氧化的作用，进一步分析和验证其预防白内障的机理和功效。
1 材料与方法
1.1 材料 采用2个月龄Wistar雄性大鼠30只，体重149～152 g，由河北医科大学实验动物中心提供。许可证号：SCXK(冀)20031003。中药由制首乌、北沙参和紫丹参三味药组成，由河北医科大学第三医院制剂室制成口服液。谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒均由南京建成生物公司提供。D半乳糖由上海试剂二厂生产，批号：05107501。实验仪器：722分光光度计(上海精密仪器厂生产)；日立H600型透射电镜(日本日立公司生产)。
1.2 方法
1.2.1 动物的分组与模型制备：将实验动物随机分为3组，每组10只。正常对照组：正常大鼠；衰老模型组：大鼠每日颈背部皮下注射D半乳糖100 g/kg体重，连续注射40 d，形成糖代谢紊乱所致的亚急性衰老模型；中药治疗组：上述造模的同时，每日2次给予制首乌、北沙参、紫丹参三味药制成的口服液(以下简称中药)灌胃4 ml/次，持续40 d。40 d后处死所有实验动物，测定观察指标。
1.2.2 取材和标本的处理： 各大鼠于40 d后股动脉放血处死，迅速取出晶状体和肝脏组织。将取出的晶状体组织去除血液，滤纸拭干，称重，放入5～10 ml的小烧杯内。取9倍于组织重量的生理盐水倒入组织烧杯，用组织捣碎机研磨成10%组织匀浆，1 000～2 000 r/min离心10 min，取上清液进行GSHPX、SOD活力和MDA含量的测定(具体步骤和计算方法严格按照试剂盒说明书进行)。
将肝脏组织切成1 mm3大小的组织块，固定于4%戊二醛磷酸缓冲溶液中，4℃，保存1 h；PBS冲洗；1%锇酸，4℃，后固定1 h；PBS冲洗；50%、70%、80%、90%、100%乙醇梯度脱水；100%丙酮浸透15～30 min；包埋剂包埋；分别在37℃、45℃、60℃，各24 h聚合；用超薄切片机切成50 nm的超薄切片；醋酸铀和枸椽酸铅双重电子染色；透射电镜观察照相。
1.3 统计学分析 应用SPSS 12.0统计软件包进行统计学处理，计量资料以±s表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 中药对大鼠晶状体自由基代谢的影响 注射半乳糖后衰老模型组大鼠与正常对照组比较晶状体中SOD、GSHPx活力明显降低(P<0.01)，MDA含量明显升高(P<0.01)。中药治疗组大鼠晶状体SOD、GSHPx活力与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，较衰老模型组明显升高(P<0.01)；而MDA含量较正常组和衰老模型组均有明显降低(P<0.01)，见表1。表1 3组大鼠晶状体中GSHPx(U/mg prot)、SOD(U/mg prot)、 MDA(nmol/mg prot)活力和含量的比较 注：与正常对照组比较，*P<0.01；与中药治疗组比较，＃P<0.01
2.2 中药对大鼠肝组织超微结构的影响 正常对照组：肝细胞体积大小正常，细胞核染色质均匀分布，核膜完整，无变形(图1)；细胞质内有大量的线粒体、粗面内质网、游离核糖体，线粒体嵴较完整(图2)，粗面内质网无脱颗粒现象(图3)。衰老模型组：肝细胞体积缩小，细胞核染色质浓缩，电子密度增加，边集于核膜下，厚薄不均，有的部分形成半月，部分核膜不整形(图3)；细胞质中线粒体体积缩小、数量减少，部分和大部分嵴融合消失(图4)，粗面内质网有轻度脱颗粒现象(图4)，糖元数量基本正常。中药治疗组：肝细胞体积正常，细胞核染色质较均匀分布，部分核膜不整形(图5)；细胞质中各细胞器无明显变化，线粒体和粗面内质网体积数量均正常(图6)，可见初级溶酶体。
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