作者：王晓昆，侯炜，唐瑛，邓惠玲，杨李，刁波 作者单位：1 (430070)中国湖北省武汉市，广州军区武汉总医院医学实验科；2(430071)中国湖北省武汉市，武汉大学病毒学国家重点实验室
【摘要】目的：探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)感染与2型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)的关系。方法：采用聚合酶链反应(chain reaction technique , PCR)技术分别检测T2DM 患者86例（单纯T2DM组40例、视网膜病变组46例）以及正常对照组30例外周血中的CMVDNA，测定血浆内皮素（endothelin, ET）和一氧化氮（nitric oxide，NO）。结果：T2DM视网膜病变组CMVDNA检测阳性率(65.2%)明显高于单纯T2DM组（35.0%）和对照组(13.3%，P<0.01)，T2DM视网膜病变组ET、NO含量与单纯T2DM组和对照组比较也有显著差异。结论：CMV感染与糖尿病视网膜病变的发生发展有关，CMV感染可能加重糖尿病视网膜病变。
【关键词】 巨细胞病毒；糖尿病视网膜病变；内皮素；一氧化氮
Relationship between cytomegalovirus infection and type 2 diabetic retinopathy
XiaoKun Wang, Wei Hou , Ying Tang, HuiLing Deng, Li Yang, Bo Diao
1 Department of Medical Experiment, Wuhan General Hospital of Guangzhou Military Command of Chinese PLA, Wuhan 430070, Hubei Province, China; 2 State Key Laboratory of Virology, Wuhan 430071, Hubei Province, China
Correspondence to: Ying Tang. Department of Medical Experiment, Wuhan General Hospital of Guangzhou Military Command of Chinese PLA, Wuhan 430070, Hubei Province, China. [email protected]
AbstractAIM: To explore the association between cytomegalovirus (CMV) infection and type 2 diabetic retinopathy(DR).
METHODS: Blood samples were collected from 40 cases with nonretinopathy T2DM, 46 cases with type 2 diabetic retinopathy and 30 normal controls. CMVDNA was detected by polymerase chain reaction technique (PCR). Plasma endothelin (ET) and nitric oxide (NO) were examined by radioimmunoassay. RESULTS: Positive rates of DR (65.2%) was obviously higher than that of T2DM (35.0%) and normal control (NC) group (13.3%, P<0.01). The level of ET and NO of DR group was significantly higher than that of T2DM and NC group. CONCLUSION: CMV infection is related to the occurrence and development of DR, and also may aggravate DR.
KEYWORDS: cytomegalovirus; diabetic retinopathy; endothelin; nitric oxide
0引言
巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)是一种可导致多种疾病的DNA病毒。自Lohr 等[1 ]发现CMV与糖尿病有关以来,CMV与糖尿病的关系已被重视。随着2型糖尿病（type 2 diabetic mellitus,T2DM）的患者数量急剧增加，T2DM各种慢性并发症已经成为临床工作的重点,其中，视网膜病变是T2DM的常见并发症，它严重地影响患者的生活质量。本研究采用聚合酶链反应(chain reaction technique , PCR)技术检测糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)患者CMVDNA，并采用放射免疫法检测DR患者血浆内皮素（endothelin, ET）和一氧化氮（nitric oxide，NO）水平，以探讨CMV感染与DR的关系。
1对象和方法
1.1对象
T2DM患者86例，为200509/200606内分泌科住院患者，诊断符合1999年WHO糖尿病诊断标准，排除糖尿病酮症、急性感染、肿瘤、心脏疾病、肾脏疾病和自身免疫性疾病。其中，男49例，女37例；年龄35~77(平均53.1±10.8)岁；病程1mo~30a。将86例T2DM分为单纯2型糖尿病组(T2DM)组40例（男22例，女18例；平均51.9±9.7岁）和视网膜病变(DR)组46例（男27例，女19例；平均54.1±8.9岁）。正常对照组(NC)30例，男17例，女13例；年龄39~66(平均49.6±8.7)岁，系我院健康体检人员。各组年龄、性别、质量无统计学差异。
1.2方法
1.2.1 DNA提取
T2DM患者治疗前，NC组体检时采集清晨空腹静脉血5mL，用EDTA抗凝，经2000r/min，10min离心分离血浆及血细胞，再从血细胞中分离出白细胞，用酚氯仿法抽提白细胞中的DNA，用紫外分光光度计检测DNA的纯度和浓度。
1.2.2 CMVDNA检测
采用PCR技术[2]。引物、CMVDNA阳性标本及扩增实验条件由武汉大学病毒学教育部重点实验室提供。上游引物：5’TGGACCTGGCCAAACGAGCCC3’；下游引物：5’TGGACGAGGCTGCCCATGAGG 3’；扩增条件为：93℃ 45s，56℃ 45s，72℃ 45s，32个循环[3]。阴性对照采用蒸馏水。扩增产物经20g/L琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果，若225bp处出现条带则为阳性。
1.2.3血浆ET的测定
采用放射免疫分析法测定T2DM组，DR组和NC组患者静脉血血浆中ET的含量，试剂盒购自北京福瑞生物工程公司，检测方法按药盒说明书的要求进行操作。
1.2.4血浆NO的测定
采用硝酸还原酶法测定T2DM组，DR组和NC组患者静脉血血浆中NO的含量，试剂盒购自南京建成生物工程公司，检测方法按药盒说明书的要求进行操作。
统计学处理:应用SPSS 12.0软件对所获得的数据进行统计分析，其中各组间率的比较采用方差分析，各组间ET浓度以均数±标准差(±s)表示，采用两样本均数的t检验进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。
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