摘要 目的 构建分泌型人内皮抑素(ES)的真核表达载体pEGFP—N1一Endostatin重组质粒，鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以pcDNA3一Endo质粒为模板，通过PCR扩增获得人Es基因片段，且在基因前加信号肽序列，将其定向插入真核表达载体pEGFP-N1中，获得重组质粒pEGFP．N1一ES。采用HindⅢ 和BamH I双酶切法、PCR法及插入片段序列测定法鉴定该质粒。利用阳离子脂质体介导法，将其转染到人胚胎肾HEK-293细胞中，采用免疫组织化学法和Westernblot法检测转染细胞内及培养上清液中ES蛋白的表达。结果通过Hind11I和BamH I双酶切、PCR及测序鉴定证明构建出了含Es基因的真核表达载体，且插入片段正确。采用免疫组织化学法和Western blot法检测表明HEK一293细胞内及培养上清中存在相对分子质量为20 000的人Es蛋白表达。 结论 成功构建了重组质粒pEGFP．N1．ES真核表达载体，转染HEK一293细胞后可稳定有效地分泌人Es蛋白。

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