眼科研究 2000年第2期第18卷 实验研究

作者：赵普宁　Thanh　Hoang-xuan　Hervé　Robin

单位：赵普宁(570311 海口，海南省人民医院眼科)；Thanh Hoang-Xuan(法国巴黎国立BICHAT大学医院中心)；Hervé Robin(法国巴黎国立BICHAT大学医院中心)

关键词：免疫荧光；眼瘢痕性类天疱疮

　　摘要　目的 探讨免疫荧光技术对眼瘢痕性类天疱疮(OCP）的实验诊断意义。方法 应用直接免疫荧光(DIF）检测16例OCP患者的结膜和应用间接免疫荧光（IIF）以鼠食道和正常人结膜为基质检测34例OCP患者的血清。结果 DIF证实6例结膜上皮细胞基底膜上有免疫复合物(IgG和／或IgA)和／或C3呈线状沉积。以结膜为基质的IIF证实血清中抗基底膜(BMZ)抗体4例，抗细胞间物质(IIS)抗体14例，总阳性率为52.9%，而以鼠食道为基质的IIF阳性率为38.2%。结论 DIF对诊断眼瘢痕性类天疱疮是有用的；IIF也有助于眼瘢痕性类天疱疮的诊断及疗效评估；孤立的上皮内自身免疫瘢痕性结膜炎可能为一新的类型。

　　分类号　R 770．3

Immunofluorescent studies on ocular cicatricial pemphigoid

Zhao Puning，Thanh Hoang-Xuan，Herv%26eacute; Robin．

　　Department of Ophthalmology，People’s Hospital of Hainan Province，Haikou 570311

　　Abstract ObjectiveTo study the usefulness of immunofluorescent technique for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid． M ethodsThirty-four patients with ocular cicatr icial pemphigoid were studied by indirect immunofluorescence（IIF）on their sera with rat esophagus and normal human conjunctiva as tissue substrates．Direct immunofluorescence （DIF） was performed on the conjunctival biopsy specimens of 16 patients．ResultsIn 6 cases of the 16 patients，DIF of conjunctiva showed a linear deposition of immunoreactants （IgG and／or IgA） and／or C3 on the basement membrane zone （BMZ）．Of the 34 patients，4 had detectable circulating anti-BMZ antibodies，14 and 7 patients demonstrated antibodies binding to the intraepithelial intercellular substance （IIS） of human conjunctiva and rat esophagus，respectively．The positive rate of IIF on human conjunctiva is 52.9％ and on rat esophagus 38.2％．ConclusionsDIF is useful for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid．IIF also can help for the diagnosis and the evaluation of the treatment of ocular cicatricial pemphigoid．Isolated intraepithelial autoimmune fibrozing conjunctivitis may be a new entity．

　　Key word　simmunofluorescence ocular cicatricial pemphigoid

　　眼瘢痕性类天疱疮(ocular　cicatricial　pemphigoid，OCP)是以慢性进行性结膜瘢痕形成为特征的自身免疫性疾病^［1，2］，它可引起结膜穹隆缩短，内翻倒睫，附属泪腺损害，角膜和结膜角化，睑球粘连，最终导致失明，法国称之为眼假性天疱疮或Lortat-Jacob病。该病没有地理和种族差异，以老人和女性患病多见。临床上常根据其临床特征而予以诊断，免疫抑制剂治疗有效。近年来研究证实该病的自身免疫性特征：在皮肤和粘膜上皮细胞的基底膜有免疫球蛋白(主要是IgG)和补体的沉积^［1～4］，但国内对该病的认识和文献报道甚少。现将作者于1996年在法国巴黎国立BICHAT大学医院中心进修时应用免疫荧光技术对眼瘢痕性类天疱疮所做的部分研究报告如下。

　　1　资料与方法

　　1．1　病人及眼科检查

　　收集1994～1996年34例符合眼瘢痕性类天疱疮临床诊断标准者，并根据Tauber和Foster分级法予以临床分级^［5，6］。

　　眼瘢痕性类天疱疮临床诊断标准：不明原因的双眼非对称性慢性进展性结膜收缩，穹隆缩短，最后导致睑球粘连，睑内翻倒睫，干眼症和角膜混浊。可仅出现眼部病变，也可伴有全身其他部位的皮肤或粘膜损害，如口腔粘膜的水泡或大疱，可破溃形成瘢痕；头面部的有水泡的红斑，愈合后遗留光滑的萎缩性瘢痕；或腹股沟及肢体的复发性无瘢痕的暴发性囊疱。

　　眼瘢痕性类天疱疮临床分级(Tauber和Foster分级法)：

　　Ⅰ：慢性结膜炎，结膜下瘢痕和纤维化。

　　Ⅱ：出现任何程度的穹隆缩短，并根据下穹隆深度丧失的范围细分为A（0～25％），B（25％～50％），C（50％～75％），D（75％～100％）。

　　Ⅲ：出现任何程度的睑球粘连，并根据睑球粘连所累及的水平范围细分为A（0～25％），B（25％～50％），C（50％～75％），D（75％～100％），记录睑球粘连带的数目。

　　Ⅳ：睑缘粘连，睑球固定。

　　1．2　活检

　　(1)其中16例病人(男性5例，女性11例)行结膜活检，均选择病变较严重眼，于局麻下取上方角膜缘附近球结膜5 mm×2 mm，放入生理盐水中，立即作直接免疫荧光(immunofluorescence，DIF）检查，术眼不需缝合，涂抗生素糖皮质激素眼膏，包眼24 h 。

　　(2)正常结膜取自单纯老年性白内障而无其他皮肤粘膜疾病患者，在白内障摘出手术中，以同样方式取球结膜，迅速包埋，作5 μm冰冻切片，－80℃低温保存待用。

　　(3)取鼠内脏组织(肝、食道等)同法作快速冰冻切片，低温保存待用。

　　1．3　血清

　　34例病人(男性10例，女性24例)均抽血制备血清，分装多个小管(每管约0.5 ml)，－80℃保存，待行间接免疫荧光(IIF)检查。

　　1．4　直接免疫荧光法

　　根据Foster的方法^［1］行直接免疫荧光检查。

　　将所取病人结膜迅速包埋于OCT(USA)中，作5 μm冰冻切片；应用荧光素结合的羊抗人IgG，IgA，IgM，C3(Berhing)，滴度1∶10，室温下30 min；PBS浸洗两次各20 min；盖玻片固定，立即于荧光显微镜下读片，记录结果。

　　1．5　间接免疫荧光法

　　根据常规方法行间接免疫荧光检查^［3］。

　　从低温冰箱中取出病人血清和正常人结膜切片，置室温1 h；同时取鼠食道切片，置干燥器30 min；病人血清1∶10滴盖正常结膜切片和鼠食道切片，室温孵育30 min；PBS浸洗2次各10 min；荧光素标记的羊抗人IgG，IgM，IgA（Dako)1∶10，30 min；PBS浸洗2次各10 min；盖玻片固定，立即荧光显微镜下读片，记录结果。以正常人血清和已确诊为眼瘢痕性类天疱疮的病人血清分别作阴性和阳性对照。

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