眼科研究 2000年第2期第18卷 实验研究
作者：张晓红 李筱荣 孙慧敏 袁佳琴
单位：300070 天津医科大学世界人工晶体中国天津培训中心
关键词：转化生长因子β；晶状体上皮细胞；细胞凋亡
摘要 目的 探讨转化生长因子β(TGF-β)对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 MTT法测定细胞经不同浓度TGF-β作用后的增殖情况；以TUNEL技术研究TGF-β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 TGF-β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖，抑制率高达35%。原位凋亡测定显示TGF-β作用30 min至8 h可明显诱导晶状体上皮细胞凋亡，阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀着色。结论 转化生长因子β抑制晶状体上皮细胞增殖的一个重要途径是诱导细胞凋亡。
分类号 R 776
Transforming growth factor β induce apoptosis in lens epithelial cells
Zhang Xiaohong，Li Xiaorong，Sun Huimin，et al．
International Intraocular Implant Training Centre，Tianjin Medical University，Tianjin 300070
Abstract ObjectiveTo study the effects of transforming growth factor β （TGF-β） on inducing apoptosis in bovine lens epithelial cells （LECs） in vitro．MethodsThe third passage LECs were seeded in the presence of different concentrations of TGF-β2．MTT assay was used to assess the cell proliferation．Apoptosis induced by TGF-β2 was studied by TDT-mediated digoxigenin-dUTP nick-end labeling （TUNEL） technique．ResultsTGF-β significantly inhibited the proliferation of LECs，and the maximal inhibitory rate was 35％．In situ apoptosis detection showed that both 0.01 ng／ml and 0．1 ng／ml TGF-β could induce apoptosis apparently in LECs．By light microscopy，the nucleus of normal cells were stained green，while that of apoptotic cells were stained yellow or brown．The percentage of apoptotic cells increased more than two times when LECs co-cultured with TGF-β．ConclusionIt is suggested that inducing apoptosis may be one of the important pathways of transforming growth factor β in inhibiting the proliferation of lens epithelial cells．
Key word stransforming growth factor β lens epithelial cells apoptosis
晶状体后囊混浊是人工晶状体植入术后的主要并发症，目前认为后囊混浊的发生主要与术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells， LECs)有关。转化生长因子β（transforming growth factor β，TGF-β）在体内广泛存在，对眼等多种器官的胚胎发育、组织修复、纤维化等起作用。眼内多种组织，特别是房水及晶状体上皮细胞中有TGF-β及其受体的表达［1］。本文以体外培养的牛眼晶状体上皮细胞为对象，研究TGF-β对其增殖的作用，并探讨TGF-β的作用机理。
1 材料与方法
1．1 细胞培养
取新鲜牛眼，剪去眼球周围组织及结膜，75%乙醇浸泡两次，各10 min。于超净台中沿角膜缘剪开，划断悬韧带，取出晶状体。撕下前囊，经D-Hanks液冲洗后，剪碎，置于DMEM培养液(рН 7.2～7.4，含10%胎牛血清)中。37 ℃，5% CO2，饱和湿度培养。每3天换液1次。
1．2 MTT测定
将第3代细胞接种于96孔平底培养板中，终浓度5×104／ml。24 h后加入不同浓度TGF-β2(美国R%26D Systems Inc．)，每一浓度3个平行样。培养至所需时间后加入5 mg／ml MTT溶液10 μl。继续培养5 h后加入二甲基亚砜溶液，于酶标仪570 nm测吸光值。
1．3 细胞凋亡的测定
选用第3代细胞。将细胞数调整至5×104／ml，接种于24孔培养板(每孔内预置5 mm2玻片)内。24 h后加入0.01 ng／ml或0.1 ng／ml TGF-β2，培养0.5，1，2，4，8 h后，取出每孔内玻片进行凋亡测定。
采用美国Oncor公司的原位凋亡检测试剂盒(Apop Tag in situ apoptosis detection kit，catalog＃：S7100-KIT）。细胞经过氧化氢消除内源性过氧化物酶活性，以末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase，TDT)介导地高辛标记的尿苷三磷酸(digoxigenin-dUTP)与DNA断端结合，经地高辛抗体放大结合信号后显色［2］，光镜下计数阳性细胞核。经高三尖杉酯碱作用的HL-60细胞做阳性对照［3］，阴性对照中以蒸馏水代替TDT酶。
1．4 统计学处理采用配伍设计的秩和检验［4］。
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