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3讨论
糖尿病视网膜病变发病机制目前并不完全清楚。传统观点认为高血糖导致微血管病变与多元醇通路活性增高、糖基化终产物形成增多、蛋白激酶C激活以及氨基己糖通路活性增高有关 [4.5]。有研究显示：DR形成过程中，线粒体电子传递链中超氧化物增多[5]，即氧化应激可能是DR共同发病机制。高血糖被认为是DR发病的基础，导致氧化酶损伤，细胞因子表达增加、活化，血管内皮功能紊乱，微血栓形成，产生微循环障碍，组织缺血缺氧，诱导新生血管形成等；在这一病理过程中，血管内皮细胞的活动是DR形成的中心环节。GBE是临床常用的中药，其主要药效成分是黄酮类和内酯类化合物，药理学作用:（1）清除自由基，抗氧化作用；（2）拮抗血小板活化因子（PAF），降低血粘度，减少红细胞聚集，抗血栓，降低毛细血管通透性；（3）影响葡萄糖的摄取和糖原的合成。因此，本研究中我们探讨了GBE对高糖条件下HRCECs增殖和凋亡的影响，以进一步阐明GBE对DR的作用。
本研究显示，GBE能促进高糖条件下HRCECs增殖，并存在浓度和时间依赖性；另外，我们观察到高糖条件下HRCECs增殖指数降低，与低糖组比均有显著性差异（P＜0.05），表明高糖抑制HRCECs增殖。文献报道, 高糖作用于培养的人微血管内皮细胞,其增殖受到抑制，增殖率下降[6 ], 与本研究结果一致。高糖可导致氧自由基产生增多[7]。Graier等[8 ]研究发现高糖对内皮细胞增殖的抑制作用与自由基有关，自由基攻击膜蛋白及胞内的酶系统和核酸, 使细胞增殖率下降。因此我们推断GBE促进高糖条件下HRCECs增殖主要是GBE清除自由基，抗氧化的作用，也可能与GBE影响葡萄糖的摄取和糖原的合成等其他多因素有关，须进一步探讨。
我们在实验中运用AO/EB荧光双染法和流式细胞术两种不同方法检测HRCECs的凋亡，结果均表明：GBE能降低高糖条件下HRCECs凋亡率，抑制HRCECs凋亡的发生；并存在浓度依赖性：随GBE作用浓度的升高HRCECs凋亡率下降，且组间有显著性差异（P＜0.05）。DR形成过程中是否有内皮细胞的凋亡存在争议，Li等[9]发现高糖引起周细胞的凋亡，未见内皮细胞的凋亡，但刘学政等[10]报道大鼠DR早期已存在视网膜血管内皮细胞凋亡。Mizutani等[11]观察发现DR患者及早期糖尿病大鼠的视网膜微血管内皮细胞凋亡加快。马建芳等[12]发现高糖诱导HRCECs的凋亡。我们的研究也证实了这一结果，但是高糖诱导HRCECs凋亡的分子机制并不清楚。研究表明氧化应激是重要的细胞凋亡诱导因子，高糖状态下细胞糖代谢加剧，甚至代谢紊乱，使细胞内反应性氧自由基（ROS）水平升高，谷胱甘肽氧化还原循环障碍，细胞清除氧自由基能力下降，诱导细胞凋亡[13,14]。我们认为GBE降低高糖条件下HRCECs的凋亡与清除氧自由基，抗氧化以及影响糖代谢的作用密切相关，也可能是GBE影响细胞内信号传导通路共同作用的结果，我们将进一步研究证实。
综上所述，我们的实验研究表明：GBE能促进高糖条件下HRCECs的增殖，抑制其凋亡，增强HRCECs在高糖条件下的生存活力，使HRCECs的增殖和凋亡处于正常的动态平衡，有利于血管内皮正常生理功能的恢复、稳定；GBE对预防DR的形成、发展有重要的积极意义，具有广阔的临床应用前景。
【参考文献】
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9 Li W, Liu X, Yanoff M, et al. Cultured retinal capillary pericytes die by apoptosis after an abrupt fluctuation from high to low glucose levels: A comparative study with retinal capillary endothelialcell. Diabetologia 1996;39:537547
10刘学政,萧鸿,王中彬,等.糖尿病早期大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡研究.眼科研究 2001;19(1):3538
11 Mizutani M,Kern Ts,Lorenzi M.Accelerated death of retinal microvascular cells in human and experimental diabetic retinopathy. J Clin Invest 1996;97(27):28832890
12马建芳，杨中汉，宋志宏，等.大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡.第一军医大学学报 2003;23(5):435438
13刘伟，李红.银杏叶提取物的药理作用及其在眼科疾病的临床研究进展.国际眼科杂志2008；8（8）：16471649
14李才锐，孙曙光，姜德咏，等.银杏叶提取物治疗早期糖尿病视网膜病变观察.国际眼科杂志2006；6（1）：7881 上一页 [1] [2] |
