作者：康刚劲 李平华 张 新 陈再洪 刘 玉
作者单位：（400016）中国重庆市，重庆医科大学附属第一医院眼科
【摘要】 目的：观察雌二醇对萘处理卵巢切除雌性大鼠晶状体细胞及组织形态结构的影响，探讨雌二醇对大鼠晶状体保护作用的形态学机制。方法：健康雌性、性成熟SD大鼠32只随机分为4组：卵巢切除组、卵巢切除+雌二醇组（雌二醇组）、卵巢切除+雌二醇和孕酮组（雌二醇+孕酮组）、正常对照组。术后2wk起各组均用300g/L萘混悬液灌胃（0.5g/Kgbw,2次/wk）,肉眼和裂隙灯显微镜观察各组大鼠晶状体变化。灌胃6wk后处死大鼠，用放免法检测血清中雌二醇和孕酮浓度，取其晶状体分别进行光镜下组织细胞的形态观察，扫描电镜下晶状体纤维厚度及指突数的测定。 结果：裂隙灯显微镜下，各组均有不同数量的大鼠晶状体出现空泡、小水裂以及前囊点状混浊，但各组间差异无显著性。光镜下，卵巢切除组表现出较其他三组更重的细胞和组织损害严重，而雌二醇组以及雌二醇+孕酮组则与正常组对照组表现相似。扫描电镜下，卵巢切除组晶状体纤维厚度较正常组增加(P<0.01)，指突数较正常组少(P<0.01)，而雌二醇组和雌二醇+孕酮组两项指标均与正常组接近。 结论：雌二醇可能通过维持晶状体囊膜及晶状体上皮细胞正常结构，防止晶状体上皮细胞增殖，减轻晶状体皮质纤维细胞水肿，维持细胞连接的形态和数量，维持晶状体皮质纤维细胞的规则有序排列等途径发挥其对晶状体的保护作用。
【关键词】 雌二醇 晶状体 卵巢切除术 大鼠
0引言
流行病学资料显示,在白内障的发病率中表现出男女性别差异，女性高于男性，且绝经后表现更为明显；绝经后接受激素替代治疗（hormones replacementtherapy,HRT）的女性其白内障患病率明显低于未使用者及同龄男性[1，2 ]。进一步的实验研究结果初步显示，HRT对年龄相关性、辐射性、中毒性以及代谢性白内障有保护作用，雌激素可防止晶状体的混浊，抑制白内障的发生，对晶状体有保护作用[35]。雌激素属除了可调节男女生殖系统及其组织的生长、代谢及生理功能外，对脑、心血管系统、骨胳等组织及机体各种生理状态的维持也发挥着重要的调节作用。近期研究表明，包括雌激素在内的性激素参与如泪腺、眼表组织、晶状体、视网膜和脉络膜等眼部组织的病理生理过程[6]。人体内自然存在的雌激素中以雌二醇（estradiol,E2）活性最强，临床上常与孕激素联合应用于卵巢切除术后及绝经后的替代治疗。本研究通过建立雌性大鼠绝经后白内障模型，观察雌二醇对模型晶状体细胞及组织形态结构的影响，从而探讨雌二醇对大鼠晶状体保护作用的形态学机制。
1材料和方法
1.1材料 健康雌性、性成熟SD大鼠32只（第三军医大学大坪医院野战外科研究所动物中心），体质量0.20～0.25kg，随机分为雌二醇组、雌二醇+孕酮组、卵巢切除组以及正常对照组。正常组对照组只行腹膜切开，其余三组行双侧卵巢切除术。苯甲酸雌二醇注射液 (上海通用药业股份有限公司)，黄体酮注射液（浙江仙琚制药股份有限公司），萘(Naththalene)(上海远航试剂厂)，雌二醇放免试剂盒、孕酮放免试剂盒（天津德普生物技术和医学产品有限公司）。
1.2方法 卵巢切除模型的制备：速眠新麻醉后作纵形腹部皮肤切口，逐层分离暴露并结扎后切除双侧卵巢。给药方法：术后2wk起4组大鼠均用300g/L萘混悬液1.66mL/kg bw，再次灌胃，2次/wk；雌二醇组隔日肌注苯甲酸雌二醇注射液0.025mg/kg·次,雌二醇+孕酮组隔日肌注苯甲酸雌二醇注射液0.025mg/kg·次和黄体酮注射液0.005mg/kg·次，正常组及卵巢切除组隔日肌注灭菌注射用水0.1mL/Kg·次，共给药6wk。观察内容：大体观察大鼠全身反应及眼部变化，1次/wk散瞳肉眼观察及裂隙灯显微镜检查晶状体变化并记录。光镜下晶状体细胞形态和组织结构的观察：用药6wk后处死大鼠取出晶状体，固定后制作石蜡切片，HE染色，显微镜下观察照相。扫描电镜(scanning electronic microscope,SEM)下晶状体纤维超微结构的定量分析：将取出晶状体用戊二醛固定；锇酸染色固定；丙酮梯度脱水；沿前后轴断裂样品，临界点干燥，粘台；喷镀；观察并照相，图像分析系统计数范围为长8μm，4根晶状体纤维的指突数，测定4根晶状体纤维的厚度。放免法检测血清雌二醇、孕酮浓度：取除大鼠眼球标本后立即经伤口处收集静脉血，1wk内用放免试剂盒检测雌二醇、孕酮浓度。表1 各组大鼠晶状体纤维厚度SEM定量分析 表2 各组大鼠晶状体纤维指突数SEM定量分析 统计学处理：所有数据均采用SPSS 11.5统计软件进行分析，用方差分析、SNK法(q检验)进行组间均数两两比较，用Pearson卡方进行组间率比较，以α=为显著性水准。
2结果
2.1裂隙灯显微镜下各组大鼠晶状体变化 裂隙灯显微镜检查观察到各组均有不同数量的大鼠出现单眼或双眼晶状体前囊细点状混浊、浅皮质空泡或水裂。卵巢切除组在用药4～5wk时4只（ 6眼）相继出现晶状体前囊细点状混浊，赤道前部浅皮质空泡和水裂，以后病变稳定；其他各组在用药第6wk时发现有晶状体改变，其中正常组1只（2眼）、雌二醇组2只（3眼）、雌二醇+孕酮组1只（1眼）出现浅皮质空泡或水裂，四组间晶状体混浊率无显著性差异。
2.2光镜下各组大鼠晶状体组织结构的观察 光镜下正常对照组晶状体囊膜（lens capsular，LC）完整连续，与晶状体上皮细胞（lensepithelial cells，LECs）粘附紧密;LECs排列略不齐，细胞核多形，同一解剖部位核大小形态略有差别；晶状体纤维细胞(lens fiber cells, LFCs)染色略深，排列规则紧密，赤道附近浅部皮质见少量细小空泡，未见明显水裂。雌二醇组晶状体囊膜部分缺失，与LECs有轻微分离;LECs排列略不齐，核呈多形性， LFCs染色略深，排列较规则、紧密，LFCs间有少量空泡和裂隙形成。雌二醇+孕酮组表现与雌二醇组相似。卵巢切除组晶状体囊膜断裂、缺失以及与LECs分离明显，LECs排列紊乱，赤道部细胞增生重叠；浅皮质内大量空泡形成，较多水裂出现，LFCs间大小不等嗜伊红液体积聚，部分LFCs断裂。
2.3各组大鼠晶状体纤维厚度及指突SEM定量分析 SEM下各组大鼠晶状体皮质纤维排列不同程度紊乱，皮质纤维间指突大小不等，数量减少。卵巢切除组晶状体纤维厚度较另外三组增厚（P<0.05，P<0.01），而其余三组间无显著性差异（表1）。卵巢切除组指突数较另外三组减少，差异有显著性（P<0.01，P<0.05），而其余三组间无显著性差异（表2）
2.4各组大鼠血清雌二醇与孕酮水平 卵巢切除组血清雌二醇与孕酮显著低于正常组（P<0.01），补充雌二醇与孕酮后的雌二醇及雌二醇加孕酮组血清雌二醇浓度接近于正常组，雌二醇及雌二醇加孕酮组血清雌二醇浓度无显著性差异。
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