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2结果
与对照组相比,RPE细胞中的PDGFR的表达水平下调,且随给药浓度增加表现出上调趋势。而细胞中的EGFR的表达水平上调,且随给药浓度增加（图3A）。RPE细胞中PDGFR的表达水平随处理时间延长出现上调趋势；而EGFR的表达水平则随给药时间延长先显著上调而后缓慢增加（图3B）。给药后较给药前RPE细胞均发生形态数量上的显著变化。给药前细胞生长密集且透亮,（图4A）。加17AAG 5μmol/L处理后48h RPE细胞数量明显减少,并出现凋亡细胞（图4B）。
3讨论
增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是导致视网膜脱离复位术失败的主要原因。PVR的手术治疗仍有很高的复发率，而联合药物治疗效果也不佳，因为目前的研究主要集中在抗肿瘤药物，但多数因为毒性大或效果不佳而无法用于临床[6]。PVR的发病机制尚未完全明确，目前多数认为视网膜色素上皮（RPE）细胞是起主导作用的细胞。许多细胞因子参与病理过程，包括PDGF，EGF，FGF，VEGF等，而他们主要是通过3条信号通路的一条或多条影响RPE细胞功能：Raf/MEK/ERK，PI3K/Akt和P38MAPK[7]。所以抑制这些信号通路的关键分子成为治疗PVR的一条新途径。体内正常的视网膜色素上皮细胞很少表达这些生长因子和受体,但在增殖性玻璃体视网膜病变患者的增殖膜中大量表达，这些过表达的分子可能通过上述多条转导通路促进RPE细胞分化、增殖和迁移，因而其在病理性增殖性玻璃体视网膜病变的形成中起重要作用 [4,5,8]。同时PDGF，EGF等生长因子及其受体与Hsp90,Hsp70等伴侣蛋白关系密切，在肿瘤的发生发展及转移过程中发挥重要作用，并且在肿瘤中可以被17AAG及相关衍生物所抑制[911] 。17AAG作为第1个进入临床II期实验的Hsp90抑制剂，有很强的抗肿瘤作用，而且毒性较小。17AAG抑制肿瘤细胞增殖，导致细胞凋亡,其机制可能是抑制Hsp90的功能，导致Hsp90与效应蛋白的解离，而Hsp90的效应蛋白很多是生长因子受体，如PDGFR和EGFR。我们观察到17AAG对RPE细胞的生长有抑制作用，并且没有明显的毒性作用。细胞数量明显减少,细胞形态发生变化,出现细胞凋亡。定量PCR的结果证实,17AAG对RPE细胞中的PDGFR有抑制作用而对EGFR无明显抑制作用，表明17AAG在RPE细胞中通过PDGFR和 EGFR调控信号通路产生抑制作用的机制上可能存在差异。与对照组相比,浓度梯度组和时间梯度组的RPE细胞中的PDGFR的表达水平均下调,且随给药浓度增加表现出上调趋势。低浓度及短时间17AAG处理能显著下调RPE细胞中的PDGFR表达水平，表明PDGF可能在PVR早期起作用。而EGFR在17AAG作用早期表现为上调，之后随着17AAG处理时间的延长而表现出增长缓慢的趋势，表明17AAG 对EGFR的调控影响可能与作用时间相关联，如增长处理时间可能会出现更加明显的变化。研究表明,17AAG对RPE细胞增殖相关基因具有不同程度的抑制，但其作用可能与抑制肿瘤细胞的机制不同。有研究表明,PDGF和 EGF的协同作用可能也是RPE细胞增殖的重要机理之一[4,5]。因此,17AAG对于PVR的治疗可能很有价值，但尚需加强对抑制生长因子促增殖作用的研究，进一步探讨不同生长因子在PVR发生发展中的特异调控机制及协同机制并加以分析证实。
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